李炳旻，唐浩文，马 奎，杨宇光，张翠萍

1 解放军总医院医学创新研究部 创伤修复与组织再生研究中心，北京 100853；2 解放军总医院第一医学中心 肝胆胰外科医学部，北京 100853；3 解放军总医院第四医学中心 皮肤科，北京 100084

衰老是发生于生物有机体的一个普遍特征[1]。在多细胞生物中，衰老表现为分子水平、细胞水平和组织水平的功能逐渐丧失。衰老是一项不可逆转的自然进程，越来越多的研究证据表明一些不良因素可加速细胞、组织、甚至机体的衰老，如感染、缺氧、光老化等[2]。近年来，高糖引起的细胞衰老在各个器官得到了普遍的证实[3]。在慢性高糖环境的作用下，细胞内产生大量活性氧物质(reactive oxygen species，ROS)，ROS可加速端粒缩短、引起DNA损伤反应(DNA damage response，DDR)并导致衰老相关的细胞生长停滞[4-6]。成纤维细胞在慢性糖基化过程中，其细胞骨架的Vimentin蛋白是糖基化终产物的作用靶点之一，长期刺激可导致细胞外基质的机械性能及其与细胞的相互作用均被改变，进而影响细胞的生物学功能[7-9]。本文旨在比较不同浓度和不同作用时间高糖DMEM培养液对成纤维细胞的老化作用，为高糖诱导成纤维细胞老化的体外模型建立提供一定 的参考。

材料和方法

1 实验设备和试剂 CO2细胞培养箱，赛默飞公司；荧光显微镜，莱卡公司；Realtime qPCR，赛默飞公司；中性蛋白酶Ⅱ，北京索莱宝科技有限公司；DMEM低糖培养液，Gibco；DMEM高糖培养液，Gibco；200 g/L葡萄糖溶液，Gibco；Cell Counting Kit-8试剂盒，Dojindo东仁化学科技有限公司；β-半乳糖苷酶染色试剂盒，Sigma；TRIZOL，Invitrogen；FastKingcDNA第一链合成预混试剂，天根生化科技有限公司；……