尚金燕，李桂荣，邹小丽，邵明辉，李庆亮

（山东药品食品职业学院·山东威海·264210）

沙滩黄芩为唇形科黄芩属植物沙滩黄芩Scutellaria strigillosa Hemsley 的干燥全草，为多年生草本植物，国内主产于辽宁、河北、山东、江苏、浙江等地，国外主要分布于俄罗斯、朝鲜、日本等国家。 沙滩黄芩生于海边沙滩上，具有抗风沙、耐瘠薄、耐盐碱等特点，在4月上旬开始萌动，4 月底5 月初全覆盖地面，5 月中旬进入花期，花期能够持续到10 月底，观赏价值极高，有盐碱地“薰衣草”的美誉。该植物以全草入药，具有清热利湿、消肿止痛等功效[1-2]。

由于中药材的质量受气候、土壤、栽培条件等因素的影响较大[3]，而沙滩黄芩目前有些已是人工栽培的品种。 由于栽培药材经过短期引种驯化，品质混杂，药材质量不稳定， 因此收集了威海地区不同产地的沙滩黄芩进行质量研究， 为筛选沙滩黄芩的优良种质提供依据。

1 沙滩黄芩中总黄酮的含量测定

1.1 仪器与试剂

T6 型紫外可见分光光度计( 北京普析通用仪器有限责任公司)；旋转蒸发仪( 上海亚荣仪器有限公司) 及各种常见玻璃仪器；芦丁对照品（中国食品药品检定研究所，批号：10080-201811）；所用试剂亚硝酸钠、氢氧化钠、无水乙醇、硝酸铝均为分析纯，实验用水为纯化水。

2 实验方法与结果

2.1 总黄酮含量测定

样品溶液的制备：取沙滩黄芩中粉约0.3g，精密称定，加70%乙醇40ml,加热回流3h,放冷,滤过,滤液置100ml 量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。 精密量取6ml,置50ml 量瓶中,加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

测定方法： 按照紫外可见分光光度法测定总黄酮含量，以芦丁为对照品测定其吸收值[4]。

2.1.1 线性关系考察

准确称取芦丁标准品10.24mg， 置50ml 量瓶中，加50%乙醇振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芦丁标准溶液（0.204mg·ml-1）。分别精密量取芦丁标准溶液 0、1、2、3、4、5ml 于 25ml 容量瓶中， 各加 5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀静置6min；再分别加10%硝酸铝溶液1.0ml 摇匀静置6min；最后各加入40%氢氧化钠溶液1.0ml，以50%乙醇定容，摇匀，静置15min，待测。

将芦丁标准溶液通过紫外可见分光光度计进行全波段扫描，在500nm 处有最大吸收峰。在500 nm 下分别测其吸光度，绘制标准曲线，详见图1。 结果显示芦丁质量浓度在在0～0.02mg·ml-1范围内与吸光度线性关系良好。 回归方程为 A=23.319C-0.0046，R2=0.9985。

图1 总黄酮标准曲线绘制

2.1.2 精密度试验

取供试品约0.3g，精密称定，照上述方法制备供试品溶液，照紫外可见分光光度法在500nm 处连续5 次测吸收度值，详见表 1。计算 RSD 为 0.68%（n=5），表明该测量方法的精密度良好。

表1 精密度试验考察表

2.1.3 稳定性试验

取供试品约0.3g，精密称定，照上述方法制备供试品溶液， 按照标准曲线制备的方法分别在0、15、30、45、60min，在 500nm 处测定各吸收值，详见表 2。 计算后得到RSD 为0.58（n=5），试验结果表明供试品溶液在1h 内稳定性良好，可以满足测定需要。

表2 稳定性试验考察表

2.1.4 重现性试验

精确称取5 份成山林场沙滩黄芩样品各0.3g，按照2.1 方法制备供试品溶液， 照紫外可见分光光度法在500nm 处测定测定吸光度，详见表3。 根据标准曲线方法测定黄酮含量。 计算 RSD 为 0.65%（n=5），表明该测量方法的精密度良好。

表3 重现性试验考察表

2.1.5 加样回收率试验

供试品溶液的制备： 取已准确测知含量（0.02082mg·g-1）的成山林场沙滩黄芩中粉约 0.15g，精密称定，精密加入芦丁对照品溶液（浓度为204.0μg·ml-1）1.5ml，加 70%乙醇 40ml,加热回流 3h,放冷,滤过,滤液置100ml 量瓶中, 用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。 精密量取6ml,置50ml 量瓶中,加70%乙醇至刻度﹐摇匀,即得。平行制备6 份，照上述方法分别测，计算含量。结果见表4。 结果表明，方法加样回收率良好。

表4 加样回收率试验表

2.2 不同地区沙滩黄芩黄酮含量分析

精确量取三种样品溶液各三份，每份3ml,按标准曲线制备的方法测定吸光度， 利用回归方程计算黄酮含量，结果见表5。

表5 不同产地沙滩黄芩黄酮含量

从表5 可知，不同产地沙滩黄芩中的黄酮，其中校园百草园黄酮含量最高， 平均值达到22.59 mg·g-1，其次为成山林场野生沙滩黄芩， 桥头苗圃沙滩黄芩的黄酮含量最低。

3 沙滩黄芩中黄芩苷的含量测定

3.1 仪器与试药

高效液相色谱仪 (岛津,LC-20A）； 高效液相色谱仪-检测器（岛津，SPD-20A）；高效液相色谱仪-进样器（岛津，SIL-20A）； 高效液相色谱仪-柱温箱 （岛津，CTO-10AS）； 色 谱 柱 （YMC-Triart C18，250×4.6mm 12nm）；电子天平（METTLED TOLEDO，LE204E）；电子天平（AND，GR202）；黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，20mg，97.4%， 110715-201821）；磷酸（分析纯）（烟台远东精细化工有限公司，20171214）；甲醇（色谱纯）（天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙醇（分析纯）（莱阳经济技术开发区精细化工厂，20180201）；娃哈哈纯净水；沙滩黄芩（山东药品食品职业学院百草园种植；威海成山林场采集；威海桥头苗圃基地培育）。

3.2 含量测定方法

按照中华人民共和国药典（2015 版二部）高效液相色谱法(通则0512)测定。

3.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相﹔检测波长为 280nm。 理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

3.2.2 对照品溶液的制备

取在60℃减压干燥4h 的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含60μg 的溶液，即得。

3.2.3 供试品溶液的制备

取本品中粉约0.3g,精密称定﹐加70%乙醇40ml,加热回流3h,放冷,滤过,滤液置100ml 量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。 精密量取1ml,置10ml 量瓶中,加甲醇至刻度﹐摇匀,即得。

3.2.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

3.3 不同地区沙滩黄芩黄芩苷含量分析

精确量取3 种产地的沙滩黄芩中粉， 照上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，分别进样，测定供试品中黄芩苷的峰面积，计算含量。 结果见表6。 色谱图见图2-5。

图2 黄芩苷对照品色谱图

图3 校园百草园沙滩黄芩色谱图

图4 成山林场野生沙滩黄芩色谱图

图5 桥头苗圃沙滩黄芩色谱图

表6 不同产地沙滩黄芩黄芩苷含量测定结果

由表6 可知，不同产地沙滩黄芩中的黄芩苷，校园百草园含量最高，达到4.45%，其次为成山林场野生沙滩黄芩，桥头苗圃沙滩黄芩的黄芩苷含量最低。

4 结论

本文采集了威海不同地区的沙滩黄芩， 进行了黄酮和黄芩苷含量分析，不同产地沙滩黄芩中的黄酮，校园百草园黄酮含量最高， 平均值达到22.59mg·g-1，其次为成山林场野生沙滩黄芩， 桥头苗圃沙滩黄芩的黄酮含量最低。不同产地的黄芩苷含量，校园百草园含量最高，其次为在海边砂砾地生长的野生沙滩黄芩，在苗圃基地栽培的黄芩苷含量最低。

分析3 种栽培地土质，校园百草园为砂壤土，成山林场是砂土，桥头苗圃为壤土。在苗圃地栽培的沙滩黄芩生长旺盛，植株高度和冠幅最高，但是黄酮和黄芩苷含量最低。 砂土地生长的野生沙滩黄芩植株植株最为矮小，两种物质含量位于中间。校园百草园砂壤土生长的沙滩黄芩黄酮和黄芩苷含量最高。 校园百草园的沙滩黄芩采自成山林场野生沙滩黄芩， 利用茎段繁殖的方式栽培，研究结果表明，沙滩黄芩的栽培土质宜选用砂壤土。

中药材的产地土壤直接影响中药材的品质， 土壤是不是符合生产最优质的中药材要求， 是中药材栽培生产中需要重视的关键问题。 随着中药现代化和产业化的快速发展， 中药资源持续产业化和供需矛盾不断剧烈，引种栽培成为了一种快捷的途径，但应加强产地生态环境要素与药材品质相关性的研究， 确保药材的品质。