刘长彬，卢春霞，卢守亮，倪建宏

（1. 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室，新疆 石河子 832000；2. 长江师范学院现代农业与生物工程学院，重庆 408100）

0 引言

【研究的意义】在规模化奶牛养殖生产中，奶牛产犊间隔长、繁殖效率低是影响养殖业发展的主要问题，而对配种后奶牛准确及时地进行早期妊娠诊断，是缩短空怀时间、产犊间隔和提高奶牛繁殖效率重要手段之一。目前，采用免疫分析技术检测血液或奶样中牛妊娠相关糖蛋白（Pregnancy-associated glycoproteins, bPAG）已成为国际上应用最广泛的奶牛早期妊娠检测方法[1−2]，商品化PAG-ELISA 检测试剂盒可对人工授精后28 d 的奶牛进行早期妊娠诊断，并获得较高的准确率[3−4]。但PAG 检测试剂盒主要依赖国外进口，高昂的检测成本（约40 元每头次）限制了其在国内的大规模推广应用。高纯度bPAG蛋白的获得对研发简便、经济、快速的bPAG 检测技术至关重要。【前人研究进展】牛妊娠相关糖蛋白（bPAG）属于天冬氨酸蛋白酶家族，是由胎盘滋养层细胞合成、分泌的一类糖蛋白。bPAG 基因家族至少有22 个转录本[5]，根据其产生的时间，可分为“古代组”和“现代组”。“古代组”bPAG（bPAG2、8、10-13）由滋养外胚层细胞合成，具有酶活性[5−6]；而“现代组” bPAG（bPAG1、3-9、14-22）仅在胎盘滋养外胚层双核细胞中表达，在进化过程中由于碱基发生了突变而失去酶活性。bPAG 对维持妊娠发挥一定作用，在胚胎附植后不久即迁移到母体外周血中[5−7]，因 而常作为妊娠检测的一种生物标记物[2,8]。目前，PAGs 蛋白主要采用溶液提取、硫酸铵沉淀和色谱分离等技术从母畜胎盘子叶中分离纯化而获得[9−10]，但是PAGs 蛋白种类较多，同源性较高，传统的分离纯化方法很难获得单一形式的高纯度PAG蛋白，且工艺复杂。……