孙添怡，刘 帆，仇文颖，马 超

(中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 人体解剖与组织胚胎学系，北京 100005)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种神经退行性疾病，起病隐匿，进展缓慢，患病率正逐年上升，目前缺乏有效的治疗手段[1-2]。piRNA(PIWI-Interacting RNA)是一种发现仅10余年的非编码小RNA，长度为24～32个核苷酸[3]。最初在小鼠和大鼠的生殖细胞中鉴定出piRNA与PIWI蛋白相互作用形成一种RNA诱导沉默复合物，在沉默转座过程、调节基因表达等方面发挥生物学功能[4-5]。研究发现piRNA在中枢神经系统中可能影响AD的核心病理生理过程，在β-淀粉样蛋白-42(amyloid β-protein 42, Aβ42)的异常生成、tau的分裂和翻译后标记、Aβ42和tau的清除受损等方面发挥作用[6]。基于前期研究成果，本实验选取经预测与AD相关性高的10个在人脑中表达的piRNA[7]，比较AD组和对照组中这些piRNA及其相关mRNA的表达差异，从而探索与AD相关的piRNA。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 脑组织样本:本实验所用的人脑组织都来自中国医学科学院北京协和医学院的国家发育和功能人脑组织资源库(National Human Brain Bank For Development and Functions)。所有大脑样本均根据中国人脑组织库协作联盟2019年发布的中国人脑库标准化操作规程采集[8]。所有捐献者均已签署知情同意书。本研究由中国医学科学院基础医学研究所伦理委员会批准(批准文号：009-2014)。

1.1.2 试剂：Agilent RNA 6000 Kit(Agilent)，snRNA cDNA Kit、snRNA PCR Kit、mRNA cDNA Kit、mRNA PCR Kit(北京康为世纪生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 脑组织病理染色及评分和分组：按照NIH-AA发布的AD神经病理评估指南推荐的染色及评分方法[9]，对脑组织石蜡切片进行ABC病理染色并评分，ABC病理染色包括Aβ染色、p-tau染色和Garvey银染染色。……