郑舒心，赵敏迪，邵 晨，孙海丹，刘晓燕，郭正光，孙 伟*

(1.中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 药理系，北京 100005；2.北京医院 国家老年医学中心 检验医学科，北京 100730； 3.国家蛋白质科学中心(北京) 北京蛋白质组研究中心 北京生命组学研究所，北京 102206)

近年来，尿液逐渐成为寻找疾病标志物的重要来源[1]。但是，尿液生物标志物发现的主要瓶颈之一是尿液蛋白的浓度和组成受到许多因素的影响，包括年龄、性别、饮食等[2]。因此，健康人尿蛋白质组的个体差异分析可以排除疾病标志物发现过程中个体差异的影响，为蛋白质组学研究提供背景，具有重要的临床价值[3]。

目前已有报道健康成人尿液中的个体差异蛋白，但以往分析多数是研究性别相关差异蛋白，且年龄相关差异蛋白研究深度不足[3-4]。本研究对正常人尿液进行蛋白质组分析，试图发现与年龄相关的尿蛋白，为后续的年龄相关蛋白质组学及疾病标志物研究提供线索。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 对象:尿液样本来自中国人民解放军总医院第一医学中心。受试者为29名20～69岁的健康成年人。所有受试者都没有急性或慢性疾病，在收集尿液时也没有服用任何药物。受试者年龄分组信息表1。所有受试者均签署了知情同意书，本研究得到了中国医学科学院基础医学研究所伦理委员会的批准(伦理审批号：047-2019)。

表1 受试者年龄分组Table 1 Groups based on age of urine donors

1.1.2 试剂:二硫苏糖醇(dithiothreitol，DTT)、碘乙酰胺(iodoacetamide，IAM)、尿素、硫脲(Sigma-Aldrich 公司)；胰蛋白酶(质谱级)(Promega公司)；乙腈、甲酸、乙醇、碳酸氢铵均为色谱级(Merk公司)。……