陈利娜，刘 志，张 超

(1.南方医科大学 基础医学院 生化与分子生物学教研室，广东 广州 510515； 2.南方医院 超声科，广东 广州 510000；3.湘南学院 基础医学院，湖南 郴州 423000)

放射治疗(radiotherapy)常用于肿瘤治疗，然而电离辐射在杀伤肿瘤细胞时也会损伤正常组织和细胞，提高肿瘤细胞对辐射的敏感性是提高肿瘤细胞杀伤效率和减少健康细胞损伤的关键。电离辐射(ionizing radiation)是一种有效的DNA损伤因子，可导致细胞生物损伤[1]。众多基因和通路可影响肿瘤放疗效果，研究与DNA损伤密切相关的基因是寻找放疗靶基因的方法之一。

秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans，C.elegans)有许多高度保守的与人类癌相关的基因和通路，且对电离辐射表现出较高的敏感性，是一种理想的电离辐射研究模型[2]。本研究采用X线照射秀丽隐杆线虫，检测DNA损伤修复相关基因的表达，以及线虫死亡率、生育力变化，探讨辐射损伤修复的分子机制，为寻找放疗潜在靶点提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

野生型秀丽隐杆线虫N2、大肠杆菌OP50(华南农业大学赠予)；NGM培养基、M9缓冲液按照参考文献[3]配制而成，RNAiso Plus试剂、反转录试剂和SYBR®PCR试剂盒(TaKaRa公司)；PCR引物(广州嘉吉生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 秀丽隐杆线虫的培养及计数：取50条产卵期秀丽隐杆线虫接种至培养有大肠杆菌菌株OP50的NGM琼脂平板，于20 ℃培养箱中培养2～3 h，挑走母虫后继续培养24 h。线虫计数采用稀释法：M9缓冲液冲洗收集培养皿中线虫至离心管，稀释50倍，62 ℃水浴1 min后混匀，取1 mL线虫悬液至画好方格的35 mm的培养皿，在体式显微镜下放大100倍对线虫计数，计数重复3次，取平均值,再乘以稀释倍数即为线虫总数。……