于甜乐，马 晗，吴新华，陈章荣，孙 彪，彭 媛，刘 宏*

(1.大理大学 临床医学院，云南 大理 671000；2.云南省滇东北区域医疗中心 呼吸内科，云南 昭通 657000;3.大理大学第一附属医院 心血管内科，云南 大理 671000；4.云南省跨高原心血管疾病防治工程研究中心，云南 大理 671000； 5.大理大学 跨高原心血管疾病防治研究所，云南 大理 671000)

血管紧张素2(angiotensin2，Ang2)是肾素-血管紧张素系统的主要活性肽，在体内过量表达给心血管系统带来了不利影响。多项研究[1-2]表明，Ang2诱导的心血管疾病过程中有自噬的参与。细胞自噬本质上是指细胞内异常的细胞器、折叠错误的蛋白质被溶酶体降解为氨基酸等小分子物质并再次利用的过程，是细胞的自我更新和修复的过程。当细胞遭受到饥饿、缺氧、代谢异常等胞内外刺激后，细胞发生自噬，在一定程度上维持细胞内动态平衡，是一种经典的维持细胞生存的机制[3]。自噬的调节与心脏疾病密切相关，参与了包括心肌病、心脏肥大、缺血性心脏病、心力衰竭以及缺血-再灌注损伤等过程。心肌正常运转依赖于基础水平的细胞自噬，但过度自噬会使心肌细胞死亡，加快心血管疾病的发生发展过程[4]。miRNA是内源性(<22个核苷酸组成)单链非编码RNA，与目标mRNA碱基互补配对影响mRNA的稳定性和翻译，参与心肌细胞中多种病理生理过程，对心血管疾病的启动和进展有重要的影响[5]。miR-30a表达与自噬相关，且负向调控自噬[6]。miR-30家族可通过自噬参与心血管疾病相关的心室重构，体外研究发现miR-30a通过下调Beclin-1的表达来抑制细胞自噬[7]。本研究在细胞水平上探讨miR-30a对Ang2诱导的大鼠H9c2心肌细胞自噬的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

大鼠心肌细胞系H9c2(上海中国科学院细胞库)；胎牛血清、Opti-MEM培养基和DMEM/高糖培养基(Gibco公司)；反转录试剂盒和RNA提取试剂盒(TaKaRa公司)；引物、RT试剂和荧光定量PCR试剂(Western Biotechnology公司)；血管紧张素2(Sigma-Aldrich公司)；LC3(兔来源)一抗、Beclin-1(兔来源)一抗和GAPDH(兔来源)一抗(Abcam公司)；山羊抗兔IgG二抗和山羊抗鼠IgG二抗(Sigma-Aldrich公司)；……