李颖 董明华 张萌萌 孟芳 杨晓慧

三阴性乳腺癌是对人表皮生长因子受体2为靶点的靶向治疗及雌激素受体、孕激素受体为受体的内分泌治疗一般无效的特殊乳腺癌类型，进展快，预后差[1]。目前，化疗是三阴乳腺癌治疗的常规手段，紫杉醇是治疗三阴乳腺癌的常规化疗药物之一[2]。但是化疗药物渗透性差，难以顺利通过细胞膜，无法有效杀伤细胞。低频超声可通过空化效应改变细胞膜通透性，增强化疗药物杀伤力，超声微泡可以增强低频超声的空化效应[3-4]。自噬是细胞降解或清除损伤细胞器并将代谢产物再利用的过程，适当的自噬可保护细胞自身，但剧烈的自噬反应反而加速细胞凋亡。紫杉醇可诱导三阴性乳腺癌细胞发生自噬，导致癌细胞产生紫杉醇耐药[5]。本研究观察低频超声微泡技术对紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的影响。

材料与方法

一、试剂与仪器

人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468(货号：YS-2032X)购自美国sciencell公司。

二、方法

1.细胞培养：将三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞接种于DMEM培养基(德国merck/sigma)，置于37 ℃、5% CO2培养箱(日本松下)中培养，传代后取对数期细胞进行实验。

2.MTT法检测MDA-MB-468细胞增殖：取MDA-MB-468细胞以1×105个/ml、每孔100 μl接种于96孔培养板。按以下进行分组：分组①加0、1、3、6、12、24 μg/ml紫杉醇，0 μg/ml紫杉醇为对照；分组②对照组(不进行紫杉醇及低频超声微泡处理)、紫杉醇组(6 μg/ml紫杉醇)、低频超声组(声强0.5 W/cm2、频率1 MHz、辐照时间30秒+6 μg/ml紫杉醇)和低频超声微泡组(声强0.5 W/cm2、频率1 MHz、辐照时间30秒+6 μg/ml紫杉醇+5%微泡)。培养48小时，每孔加MTT溶液(美国AMEKO)20 μl，培养4小时……