江西省部分地区鼠形动物中巴尔通体分布及基因组序列研究
2021-04-14刘晓青周海健徐晓倩熊长辉黄星魁潘欢弘
杨 梦,王 鹏,袁 辉,刘晓青,周海健,徐晓倩,熊长辉,黄星魁,谢 昀,潘欢弘
巴尔通体病是一种人兽共患病,其病原体是巴尔通体。巴尔通体是一群寄生于哺乳动物红细胞内的革兰阴性、营养要求苛刻、兼性需氧杆菌,可引起猫抓病、战壕热、卡里翁氏病、心内膜炎、视神经炎菌血症等疾病[1]。作为一类新发传染病病原体,巴尔通体的自然宿主包括鼠、兔、猫、犬、蝙蝠、牛、鹿、麋鹿等。为了解江西省鼠类动物中巴尔通体携带情况,本研究于2018-2019年采集鼠形动物肝、脾组织进行巴尔通体分离培养,并对获得的巴尔通体菌株进行全基因组测序和基因多态性分析,为巴尔通体感染的预防控制提供科学依据。
1 材料与方法
1.1样本来源 本研究2018-2019年利用鼠传疾病监测项目采集了130只鼠形动物的肝、脾组织。其中铜鼓县62只、广信区26只、横峰县22只、南城县12只、广丰区8只。
1.2试剂及仪器 胰酶大豆琼脂培养基(TSA)和胰酶大豆肉汤培养基(TSB)购自英国OXOID公司,DNA核酸提取试剂盒购自QIAGEN公司,酶购自大连宝生物工程有限公司;组织研磨器Tissuelyser购自QIAGEN公司,CO2培养箱购自美国NUAIRE公司,PCR扩增仪、成像仪均购自美国Bio-Rad公司。
1.3 方 法
1.3.1样本采集 用鼠笼或鼠夹捕获鼠形动物,所有的鼠形动物依据外形(体长、体型、毛色、耳长、尾长)、头骨、牙齿的特征进行分类鉴定,然后无菌操作采集肝、脾脏器,置含有1 mL保存液的2.0 mL冻存管中,-80 ℃保存。
1.3.2菌株分离培养和鉴定 每份样本无菌取约25 mg肝或脾组织,加入600 μL TSB后,用组织研磨器研碎,混匀,吸取 0.2 mL组织悬液接种于含 5%脱纤维羊血的TSA平板上,置于36 ℃、5% CO2的培养箱中,培养3 d后,挑取疑似菌落进行鉴定,直至第20 d。……
