（山东恒诚检测科技有限公司 山东 250000）

1.材料与方法

(1)菌株

木醋杆菌。菌株。山东省微生物重点实验室保藏。

(2)主要试剂

葡萄糖（北京陆桥），蛋白胨（北京陆桥），酵母粉（北京陆桥），无水磷酸氢二钠（国药集团，柠檬酸一水化合物（国药集团）。

(3)主要仪器

天平、高压蒸汽灭菌器、生物安全柜、恒温培养箱。

(4)培养基

杨木屑酶解液的预处理：将杨木屑与蒸馏水按1:20混合加入，调节pH为6，加入纤维素酶液和半纤维素酶液，混合均匀，50℃水浴条件下加热的时间5h。

种子培养基（g/L）：葡萄糖20，蛋白胨5，酵母粉5g，无水磷酸氢二钠0.5g，柠檬酸一水化合物0.5g。

基础发酵培养基（g/L）：葡萄糖10，杨木屑酶解液100（ml/L），蛋白胨5g，酵母粉5g，无水磷酸氢二钠2.4g，柠檬酸一水化合物1.0g，pH6。

(5)产量的测定

用镊子取出静置培养数天后培养基表面形成的细菌纤维素，在蒸馏水中小心冲洗数次，直到细菌纤维素表面的菌落和培养基洗净，然后将洗干净的细菌纤维素湿膜放入含有0.1mol/L的NaOH溶液的烧杯中，在90℃条件下水浴加热2h。然后取出细菌纤维素湿膜继续用蒸馏水冲洗数次，至中性。最后用分析天平称重。

(6)单因素法优化产酶条件

①不同接种量对发酵产量的影响

将种子液不同接种量分别接种到基础发酵培养基。30℃的恒温培养箱中培养6d，然后测定细菌纤维素的产量，筛选出最佳接种量。

②不同浓度的葡萄糖培养基对发酵产量的影响

将种子液按最佳接种量分别接种到不同浓度的葡萄糖培养基（其他成分同基础产酶培养基），其他条件保持不变。

③不同浓度的蛋白胨和酵母粉培养基对发酵产量的影响