王学博 符攀峰 任红娟 孙 丽 白峰岩

宫颈癌具有恶性程度高、发展速度快等特点，手术切除、放化疗等是目前治疗宫颈癌的主要方法，但是这些治疗方法的疗效有一定的局限性。分子靶向治疗是近些年来研究发现的具有潜在应用前景的肿瘤治疗途径，中药联合分子靶向治疗可能是未来肿瘤治疗的一种有效途径。木犀草素是天然的黄酮类化合物，具有抑制肿瘤生长和转移的作用。miR-425-5p是一个在肿瘤细胞中过度表达的微小RNA分子，具有促进胰腺癌、胃癌等肿瘤细胞浸润和转移的作用。有研究显示，miR-425-5p在宫颈癌患者中呈高表达，且与肿瘤患者的临床分期和转移程度有关。本文拟探讨木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响，以期为寻找治疗宫颈癌有效的治疗方案提供思路。

1 材料与方法

1.1 材料 宫颈癌HeLa细胞购自中国医学科学院肿瘤细胞库；基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)抗体(生产厂家：Cell Signaling Technology)；木犀草素(生产厂家：成都格利普生物科技有限公司)；c-caspase-9抗体、p-Akt抗体(生产厂家：美国Santa Cruz)；c-caspase-3抗体(生产厂家：美国ABCAM)；miRNA first-strand cDNA synthesis kit (生产厂家：美国Thermo Fisher)；inhibitor control、miR-425-5p inhibitor[生产厂家：吉满生物科技(上海)有限公司]；MMP-9抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗(生产厂家：美国cytoskeleton)；引物(生产厂家：武汉金开瑞生物工程有限公司)；Lipofectamine 2000(生产厂家：美国Invitrogen)。

1.2 方法

1.2.1 HeLa细胞转染及miR-425-5p表达水平检测 HeLa细胞中转染inhibitor control、miR-425-5p inhibitor操作同Lipofectamine 2000，步骤如下：将inhibitor control、miR-425-5p inhibitor和Lipofectamine 2000分别用DMEM稀释，混合后添加到细胞中，培养24 h以后，更换新鲜的细胞培养液继续培养。细胞在转染24 h后，采用Realtime PCR测定。即在细胞中添加Trizol试剂，充分裂解后，添加氯仿溶液，4℃，3000 r/min离心15 min，吸取上层溶液，异丙醇沉淀RNA，75%乙醇洗涤2次，-20℃保存。……