苯并[a]芘致小鼠认知功能障碍中突触相关蛋白和EphA/EphrinA5的变化
2021-04-12
山西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室,山西 太原 030001
苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,BaP)是广泛存在的一类环境污染物,主要来源于化石燃料和有机物的不完全燃烧[1]。除“三致”作用外,BaP 可通过血-脑屏障及嗅神经进入脑组织,损害中枢神经系统,引起认知障碍[2-3],但作用机制尚不十分清楚。
认知功能与突触结构可塑性密切相关[4]。突触前膜的突触素(synaptophysin,SYP)和突触后膜的突触后致密物质95(post-synaptic dense protein-95,PSD95)在维持突触结构,参与突触囊泡的转运和释放,调控突触后膜稳定性及突触可塑性中起关键作用[5]。促红细胞生成素产生肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocyte receptors,Ephs)是目前已知最大的受体酪氨酸激酶(receptors protein tyrosine kinase,RTK)家族中重要的成员之一[6],分为EphA和EphB两类。EphA受体通过与邻近细胞膜上的Ephrin配体结合进行双向信号转导,调控神经元轴突的定向延伸,调节突触结构,改变突触效能和神经元发生,进而影响学习记忆功能[7]。本研究探讨在BaP 致小鼠认知障碍中突触相关蛋白和EphA及其配体蛋白表达的改变,为BaP神经毒性的研究提供科学依据。
1 对象与方法
1.1 主要试剂和仪器
BaP(纯度>97%,Sigma,美国),EphA4 抗体(货号:21875-1-AP,BBI Life Science,中国),SYP(货号:D198927,BBI Life Science,中国),BCA 法蛋白质浓度测定试剂盒、SDS-PAGE 变性丙烯酰胺凝胶快速制备试剂盒(BBI Life Science,中国),EphrinA5 抗体(货号:SC-81945,Satan,中国),EphA5 抗体(货号:A14238,ABclone,中国),PSD95 抗体(货号:20666-1-AP,Proteintench,中国),β-actin 抗体(货号:BM0627,Boster,中国)、超敏ECL化学发光即用型底物(Boster,中国)。化学发光成像仪(Boygene Chemilmage Software,中国)。
1.2 实验动物饲养及染毒
40 只SPF 级健康成年雄性ICR 小鼠(8 周龄,体重18~22 g)购买于北京兴旺养殖场,许可证号:SCXK(京)2014-0013,在动物房(自然节律采光,室温为18~23℃,湿度为40%~70%)适应性喂养1 周后,随机分成4 组,每组10 只,分别为溶剂对照组(植物油)和BaP 低、中、高剂量染毒组。……
