龚 俊

（重庆大学生物工程学院,重庆 400044）

目前，随着生存环境恶化及生活压力加大，女性卵巢癌、宫颈癌等患者数量不断增加，男性也有一些弱精患者，针对这些患者，尤其是早期癌症患者，治愈后仍有生育需求，保存其生育能力不失为一种好的选择，细胞冻存技术就发挥了重要作用[1]。细胞低温冻存是指将细胞置于零下超低温，使其进入“休眠”状态，从而达到长期保存细胞的目的。低温能大幅降低细胞的新陈代谢速率，所以在液氮温度下细胞可以安全地长久保存，保存年限更是可以长达数十年。综上，超低温冻存技术是目前为止细胞长期保存最可靠且有效的技术。因此细胞低温保存技术在细胞移植和基因治疗等领域具有较强应用前景。

1 细胞冷冻保存

1.1 细胞冷冻原理

低温能抑制细胞体内所有的生化活动，从而使生物体内的生化反应速率降低、延长其生物活性时间。因此可以利用这一特性长时间保存生物体。一切由酶介导的生物体内新陈代谢过程中的化学变化，均服从一些共同的生化规律。瑞典科学家S.A.Arrhenius通过研究温度对化学反应速度的影响，得到了关系式 ：许多酶反应速率等试验也验证了这一关系式的正确性[2]。将活化能Ea常规范围内的数值代入该式，可推出化学反应速率随温度的降低而不断变小，同时也能推出生物变质速率与温度成反比的关系[3]。

1.2 低温损伤原理

常温条件下，细胞内、外的温度和浓度均一致，处于等温（温度）等渗(渗透压)状态，而渗透性和质膜特性对于大多数细胞低温保存的成功与否起着决定作用[4]。……