陈峰杰

河南护理职业学院，河南 安阳 455000

肝星状细胞与枯否细胞作为肝内重要的非实质性细胞，也是肝纤维化的主要效应细胞，有促进肝纤维化进程的作用。活化的HSCs是肝纤维化发生的关键细胞和核心环节[1]，可转化为肌成纤维细胞并分泌多种受体，生成大量细胞外基质，促进肝纤维化进程。KCs 可通过分泌的多种细胞因子，促使HSCs活化，参与肝纤维化过程。由于体内环节复杂多变，容易受神经、体液等多因素的影响，体外提取培养原代HSCs与KCs就显得尤为重要。现实中HSCs仅仅占肝非实质细胞总数20～30%[2]，KCs仅占25～40%[3]，KCs和HSCs的形态、密度与其它肝非实质细胞非常接近，一直以来同步提取大鼠原代KCs和HSCs较难。自1982年Knook[4]报道提取肝星状细胞方法后，国内相继报道了多种改良的分离与提取方法[5-8]，但多数报道中的提取方法为单一细胞的分离培养[9-10]，多数方法存在分离过程繁琐，成本高，细胞得率与纯度低等问题。因此，建立简便经济的大鼠原代HSCs与KCs同步分离培养方法，是研究HSCs活化、肝纤维化发生机制的前提与基础性工作。

1 材 料

1.1实验动物 SD大鼠，清洁级，体重400-450g，购自山西医科大学动物中心，普通饲料喂养。

1.2主要试剂 链酶蛋白酶、a-SMA抗体购自Sigma公司；Ⅳ型胶原酶购自Invitrogen公司；DNA酶购自北京索莱宝公司；Nycodenz购自Axis-Shield Pocoslo公司；DMEM培养基购自Gibco公司；RPMI1640购自美国HyClone公司；胎牛血清购自杭州四季青；Desmin抗体、武汉博士德公司的SABC免疫组织细胞化学试剂盒。

1.3主要仪器 Milli-Q Biocel超纯水系统、Jouan IGO-150 CO2培养箱、生物倒置显微镜。

2 方 法

2.1大鼠门静脉插管，链酶蛋白……