庄满贤，萧雪莹

(广州一品红制药有限公司，广东 广州 510760)

馥感啉口服液是广州一品红制药有限公司独家儿童用药，具有清热解毒、止咳平喘、益气疏表的功效，用于小儿气虚感冒所引起的发烧、咳嗽、气喘、咽喉肿痛症状的治疗[1]。馥感啉口服液由鬼针草、野菊花、西洋参、黄芪、板蓝根、香菇、浙贝母、麻黄、白花前胡、甘草10味药材提取而来，其中野菊花具有清热解毒、泻火平肝的功效，发挥主要药效作用[2]。

馥感啉口服液现行质量标准为WS-10230(ZD-0230)-2012Z，未对野菊花进行质量控制。薄层色谱鉴别法作为中药质量控制的有效手段，可行性已得到验证[3-5]。为了加强馥感啉口服液的质量控制，本实验建立其药效物质野菊花的薄层鉴别方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CPA225D电子天平(德国赛多利斯股份公司)；Xp6电子微量天平(梅特勒仪器有限公司)；GoodSee-20E薄层成像系统(上海科哲生化科技有限公司)；KQ300DB超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂

蒙花苷对照品(111528-201107)、野菊花对照药材(120995-201105，120995-201105)均购自中国食品药品检定研究院；聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)；馥感啉口服液(批号：20160406、20160408、20160502，广州一品红制药有限公司)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备

取馥感啉口服液20 mL，采用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用2 mL甲醇溶解，即得供试品溶液。

2.2 对照品溶液制备

精密称取蒙花苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg蒙花苷的溶液，作为对照品溶液。

2.3 对照药材溶液制备

精密称取野菊花对照药材0.3 g，置于具塞锥形瓶中，加水25 mL，加热回流1 h，放冷，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸发皿中，水浴蒸干，用2 mL甲醇溶解，即得对照药材溶液。

2.4 样品测定

参照薄层色谱法《中国药典》2015年版四部0502通则)，吸取对照品溶液5 μL、对照药材溶液2 μL以及供试品溶液2 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝溶液，热风吹干，置于紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.5 方法学验证

2.5.1 专属性试验 按馥感啉口服液处方比例，取除野菊花药材外的处方药材，按照馥感啉口服液生产工艺制备缺野菊花的阴性样品。取缺野菊花的阴性样品，参照“2.1”项下方法制备缺野菊花的阴性对照供试品。

按照“2.4”项下方法，采用蒙花苷对照品、野菊花对照药材、供试品、缺野菊花阴性对照品进行实验，结果供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰，说明该方法专属性较好。结果见图1。

1.蒙花苷对照品；2.野菊花对照药材；3～5.供试品溶液，批号分别为20160502、20160406、20160408；6.缺野菊花的阴性样品

2.5.2 灵敏度试验 按照“2.4”项下鉴别方法，比较供试品(批号：20160406)不同点样量(1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL)下斑点显色情况。结果点样量为1～5 μL时显色效果较好，斑点清晰可见，结果见图2。

1.蒙花苷对照品；2.野菊花对照药材； 3～7.供试品溶液，点样量分别为1～5 μL

2.5.3 耐用性试验 (1)不同相对湿度的影响。按照“2.4”项下鉴别方法，平行点样2个薄层板，分别在18%、88%的相对湿度条件下展开，比较显色的差异。结果显示两种极端湿度条件下显色结果良好，提示常规实验室条件下相对湿度对薄层显色无明显影响，结果见图3。

(2)不同温度的影响。按照“2.4”项下鉴别方法操作，平行点样2个薄层板，分别在4℃、35℃温度条件下展开，比较TLC图谱的差异。结果提示环境温度4～35℃不影响薄层鉴别结果。结果见图4。

3 讨论

本实验前期采用3种方法制备供试品溶液，方法1为取供试品20 mL水浴蒸干后用甲醇溶解并定容至25 mL，方法2为采用正己烷萃取后将萃取液浓缩至2 mL，方法3为采用乙酸乙酯萃取后将乙酸乙酯蒸干，再用2 mL甲醇溶解。经考察，方法3制备的供试品溶液斑点清晰，分离度较好，因此采用方法3作为供试品溶液制备方法。

1.蒙花苷对照品；2.野菊花对照药材；3～5.供试品溶液(批号分别为20160502、20160406、20160408)

前期通过对硅胶G、聚酰胺薄膜进行考察，发现聚酰胺薄膜分离效果较好，因此采用聚酰胺薄膜作为固定相；通过对不同展开剂乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)、乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)、乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)进行考察，结果发现乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)分离效果最好；考察展距分别为10 cm、20 cm的分离效果，结果展距为20 cm时分离效果较好；考察展开后直接观察和用2%三氯化铝溶液显色后观察的效果，发现采用2%三氯化铝溶液显色后斑点更清晰，因此采用2%三氯化铝溶液作为显色剂。

一系列考察结果表明，本实验方法专属性强，稳定性、重复性、耐受性均较好。点样量的多少虽对Rf值无明显影响；由于不同产地以及批次中药材的质量差异较大，每批样品的鉴别应根据实际情况调节点样。所建立的方法可用于馥感啉口服液中野菊花的薄层鉴别，为该产品的质量控制提供参考。