张展松， 陈 亮， 何少茹△， 刘玉梅， 姚植业， 冯博文

[1广东省心血管病研究所，2广东省人民医院（广东省医学科学院），广东广州510080]

细胞膜片技术[1]（cell sheet technology，CST）是近年来组织工程领域与再生研究领域应用的细胞培养新技术，其可作为干细胞应用的载体，并且结合生物材料拥有成骨和血管化能力；完整地保留了细胞自分泌的细胞外基质、细胞-细胞间连接蛋白、细胞表面相关分子受体以及细胞间离子通道，避免了细胞消化酶对细胞活性的影响[2]；具备良好的组织相容性，促进组织器官完全修复；具有一定的强度和操作性，其可通过对折、叠加等方式构建出理想的膜片厚度；有良好的各向分化能力，已被广泛应用于血管、心脏组织、皮肤、骨组织以及牙周组织等组织工程研究与再生医学领域。细胞膜片可通过温敏培养皿或抗坏血酸诱导成膜后机械剥离获得，我们前期研究显示，抗坏血酸（ascorbic acid，AA）诱导成膜更简单[3]。研究表明，转化生长因子β3（transforming growth factor-β3，TGF-β3）参与了软骨细胞增殖、分化、肥大和终末分化，能有效促进II 型胶原（collagen type II，Col II）和蛋白聚糖（proteoglycan，PG）等软骨基质形成[4-5]。但目前国内外关于组织工程领域中运用TGF-β3诱导细胞膜片软骨化少有研究。

因此，本研究于体外分离、培养髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSMCs），经抗坏血酸诱导后于体外构建干细胞膜片（stem cell sheet，SCS），探索TGF-β3 诱导骨髓间充质干细胞膜片成软骨分化的可行性。

材料和方法

1 动物

出生2 个月的新西兰大白兔，不限雌雄，体重1.5～2.0 kg，选购自南方医科大学实验动物中心，许可证号为SCXK（粤）2011-0015。……