李肖肖， 陆大祥， 王华东， 戚仁斌， 张珂珂， 王达安△

（1暨南大学基础医学院病理生理学系，国家中医药管理局病理生理重点实验室，广东广州510632；2佛山市第二人民医院护理部，广东佛山528200）

肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）是多种慢性肾脏疾病（chronic kidney disease，CKD）发展到终末期肾病（end-stage renal disease，ESRD）的共同病理基础，有效干预RIF 的发生发展是控制CKD 进展、延缓肾功能衰竭发生的关键[1]。疾病蛋白质组学（disease proteomics）通过全面、系统地观察疾病状态下蛋白质组（proteome）的变化规律来阐明疾病发生机制，并发现疾病标志物和干预新靶点。本研究采用双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）和质谱（mass spectrometry，MS）技术，分析大鼠单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）所致RIF 模型的蛋白质组表达模式的变化情况，以期发掘出有助于探讨RIF 发病规律的有价值信息。

材料和方法

1 材料与仪器

甘氨酸、十二烷基硫酸钠、丙烯酰胺、N，N，N"，N"-四甲基乙二胺、碘乙酰胺、Bradford 法和BCA 法蛋白质定量测定试剂盒及15～150 kD Protein Ladder（Bio-Rad）；二硫苏糖醇和过硫酸铵（Amresco）；IPG非线性（pH 4～7，24 cm）干胶条（GE）；考马斯亮蓝R350（上海生物工程股份有限公司）；ECL 发光液（Millipore）；β-tubulin 单抗和膜联蛋白A5（annexin A5）单抗（Abcom）；HRP 标记的抗兔和抗鼠IgG 抗体（上海碧云天生物科技公司）。

5427 R 高速低温离心机（Eppendorf）；MBX51 倒置荧光显微镜（Olympus）；RM2235 切片机（Leica）；JB-L7 组织包埋机（武汉俊杰电子有限公司）；KZ-Ⅱ电动组织匀浆器（武汉塞维尔科技有限公司）；手术器械（上海医疗器械有限公司）；Ettan IP Gphor 3 等电聚焦系统、SE 600 垂直电泳系统和ImageJ 2-DE 分析软件（GE Healthcare）；GS800凝胶扫描仪（Bio-Rad）；4800串联飞行时间质谱仪（Applied Biosystems）。

2 方法

2.1 UUO大鼠RIF模型构建及肾脏组织病理分析

2.1.1 实验动物与分组 雄性Wistar大鼠48只，体质量180～220 g，购于北京华阜康实验动物有限公司[许可证号为SCXK（鲁）2014-00070]，饲养于暨南大学动物实验管理中心SPF 动物饲养房：室温（23±2）℃，相对湿度40%～70%，标准颗粒饲料喂养，自由进食饮水。……