张 凯， 刘峰涛， 刘亚密， 陶 军， 夏林珍， 梁伶俐， 王 佐△

（1南华大学附属第二医院重症监护室，2南华大学心血管疾病研究所，湖南衡阳421001）

内皮-间充质转化（endothelial mesenchymal transition，EndMT）是上皮-间充质转化的一种特殊类型，在某些生理或病理性刺激下，内皮细胞失去其特异性抗原表型（如CD31、VE-cadherin 等），转化为间充质细胞表型[如α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、vimentin 等]，迁移和增殖能力增强，并分泌细胞外基质，且细胞黏附因子表达增加的过程。EndMT 与动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的发生发展相关[1]，而剪切应力异常可引起EndMT 的发生[2]及AS的发生发展[3]。

苦瓜蛋白（monordicin，MD）是从苦瓜果肉分离出 来 的28 kD 蛋 白 质，其 具 有 抗 炎[4-6]和 抗AS 作用[7-9]，但作用机制仍未阐明。研究发现，炎症因子可引起EndMT 发生和发展[10-12]，低剪切应力导致炎症因子表达水平增加[13]。因此，苦瓜蛋白具有抑制EndMT 的分子基础。本研究拟在低剪切应力AS 动物模型中验证苦瓜蛋白对apoE-/-小鼠AS 病变和EndMT 的抑制作用，并从抗炎的角度分析其作用机制。

材料和方法

1 实验动物及试剂

apoE-/-雄性小鼠购自南京青紫兰有限公司。从新鲜苦瓜果肉提取苦瓜蛋白；鼠源抗CD31单克隆抗体、鼠源抗α-SMA 单克隆抗体和兔源抗VE-cadherin多克隆抗体购自Abcam；羊抗鼠Cy3标记的红色荧光II抗和羊抗鼠FITC 标记的绿色荧光II抗购自北京康为世纪科技公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔II抗购自Proteintech；ECL 化学发光试剂盒和蛋白定量试剂盒（BCA 试剂盒）购自北京康为世纪科技公司；Masson 染色试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。

2 方法

2.1 实验分组及动物模型的构建 8 周龄雄性apoE-/-小鼠20 只，置于南华大学动物部SPF 级实验动物房中饲养，许可证号：SYXK（湘）2020-0002。……