姜 海 珠， 周 海 龙， 谷 金 芸， 李 宪 臻， 杨 帆

( 1.大连工业大学 生物工程学院， 辽宁 大连 116034； 2.中国生物发酵产业协会, 北京 100833 )

0 引 言

现已报道的黄原胶降解方法有物理降解法[2](辐照法、超声波等)、化学降解法[3-4](氧化剂、酸、碱等)和生物降解法[5](酶解)。其中，物理降解法常伴有交联降解反应，且自动化设备处理能力受限，难以实现工业化生产[6]；化学降解法选择性差，易产生副产物[7]；而酶法降解反应条件温和，选择性好，是降解黄原胶主链的理想方法[8]。目前，酶法降解黄原胶的报道不多，且主要采用商品化纤维素酶对黄原胶的类纤维素主链进行降解，但效果均不理想[9]。

来自热纤梭菌(Clostridiumthermocellum)的纤维素内切酶CtCel8A相对于其他来源的纤维素酶具有酶活力高、耐高温的优点[10]。因此，该酶被广泛用于酶工程研究，目的是实现纤维素到燃料乙醇的生物转化[11]。本实验对内切酶CtCel8A的编码基因进行克隆，利用大肠杆菌的高表达系统进行纯化及酶学性质表征，并考察该酶切割黄原胶主链的性能，以期为黄原胶寡糖的工业化生产提供有效、可靠地生产方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

EscherichiacoliDH5α，宝日医生物技术有限公司；质粒pET-28a (+)和E.coliBL21 (DE3)，获赠于大连化物所赵宗保研究员课题组。

限制性酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ、250 bp DNA Marker、PrimeSTAR HS DNA聚合酶，宝生物工程(大连)有限公司。

LB液体培养基：胰蛋白胨10.0 g/L，氯化钠10.0 g/L，酵母浸粉5.0 g/L；LB固体培养基：琼脂粉15.0 g/L，其余同LB液体培养基[12]。当进行质粒菌培养时，培养基添加终质量浓度为30 μg/mL 的卡那霉素。

梯度PCR仪，艾本德股份公司；DYY-11型电泳仪，北京六一科技有限公司；……