石 峰， 李 佥， 田 晶， 费 旭， 刘 向 丽， 罗 健， 张 楠， 陈 高 俊

( 1.大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034； 2.大连工业大学 分析中心, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

柚苷酶是一种重要的生物酶制剂[1]，由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶组成。柑橘类果汁加工过程中常用柚苷酶进行酶法脱苦，从而改善饮品的风味[2]。α-L-鼠李糖苷酶可将柚柑类果汁中的黄烷酮糖苷类化合物——柚皮苷(苦味较大)水解成鼠李糖和普鲁宁(苦味较小)，普鲁宁可在β-D-葡萄糖苷酶的继续作用下生成柚皮素(无苦味)和葡萄糖，使果汁脱苦[3]。近年来，随着研究的不断深入，柚苷酶开始被广泛应用于食品和医药工业[4]。

研究表明，超声刺激能够有效提高相关酶的产量[5-6]。但目前应用超声刺激强化柚苷酶发酵酶活的相关研究鲜有报道。本实验采用超声刺激对黑曲霉发酵产柚苷酶过程进行研究，并通过响应曲面法对相关操作参数进行优化，获得最佳工艺条件，为深入研究新型柚苷酶发酵策略，促进生物食品酶及生物催化的产业化发展提供基础数据和技术支持。

1 材料与方法

1.1 材 料

黑曲霉FFCC uv-11，大连工业大学菌种保藏中心提供；柚皮苷，宝鸡市方晟生物开发有限公司；脱脂豆粉，大连调味食品厂；其他化学试剂均为分析纯。

1.2 培养条件

将低温保存的黑曲霉菌种转接至斜面培养基上，30 ℃恒温培养3 d后，取孢子接种于种子培养基中，30 ℃、180 r/min培养48 h后接种到发酵培养基。改良后的发酵培养基组成(L)[7]：KH2PO4·2H2O 1.5 g，K2HPO4·12H2O 1.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，(NH4)2SO44.0 g，ZnSO4·7H2O 0.09 g，CaCl20.1 g，豆粉2.0 g，蛋白胨2.0 g，酵母浸粉1.0 g，柚皮苷6.0 g；pH 6.0。

1.3 酶活力测定方法

使用Davis法测定发酵培养基中柚苷酶活力[8-9]。……