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中华绒螯蟹水通道蛋白1基因的克隆、表达及RNA干扰研究

2021-04-02杨志刚陈春宇成永旭夏冬梅

复旦学报(自然科学版) 2021年1期

杨志刚,张 龙,陈春宇,成永旭,夏冬梅

(1.上海海洋大学 农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306;2.上海海洋大学 农业部鱼类营养与环境生态研究中心,上海 201306;3.福建省水产功能性饲料与养殖环境调控重点实验室,福建 漳州 363000)

水通道蛋白是一类跨膜蛋白,允许水和甘油等小的不带电荷的溶质穿过脂质双层细胞膜[1-4].迄今为止,已经鉴定出13个哺乳动物水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)成员(AQP0~AQP12),其中AQP0~AQP10功能已得到验证[5-6].AQP家族根据其渗透性特征可分为3组,即经典的水选择性水通道蛋白(AQP0,AQP1,AQP2,AQP4,AQP5)和甘油转运水通道蛋白(AQP3,AQP7,AQP9,AQP10)以及尚未阐明其功能的水通道蛋白(AQP11和AQP12)[3,7-9].目前,对于水生动物水通道蛋白的研究主要集中在鱼类中[10-12],对甲壳类动物的研究较少[4,13-14].

中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis,Es)在我国长江中下游的河流和湖泊中广泛分布,是一种具有养殖前景的经济甲壳动物.本文成功从中华绒螯蟹鳃组织中克隆获得了EsAQP1的全长互补DNA(cDNA),通过荧光定量PCR(qPCR)分析EsAQP1在不同组织中的表达模式,并分析了其序列特征和系统进化关系,通过测定盐度胁迫和dsRNA作用下中华绒螯蟹蛋白Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC)基因和钠钾泵(Na+/K+-ATPase)基因的表达,进一步探讨了EsAQP1在渗透压调节方面的功能,可为研究甲壳动物水通道蛋白与渗透压调节机制之间的关系积累基础资料.

1 材料与方法

1.1 动物

从上海海洋大学崇明基地捕捉实验用的中华绒螯蟹,体质量(6.50±1.21)g,暂养一周,水温21~25℃.水体pH7.5~8.0,持续充氧,每天换1/3养殖水,于每天18∶00定时投喂商品饲料.随机挑选健康的中华绒螯蟹……

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