中华绒螯蟹Na+-K+-Cl-协同转运蛋白基因的克隆和功能分析
2021-04-02杨志刚周俊宇朱靓亮成永旭夏冬梅
杨志刚,周俊宇,朱靓亮,成永旭,夏冬梅
(1.上海海洋大学 农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306;2.上海海洋大学 农业部鱼类营养与环境生态研究中心,上海 201306;3.福建省水产功能性饲料与养殖环境调控重点实验室,福建 漳州 363000)
Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(Na+-K+-Cl-Cotransporter, NKCC)是一种电中性离子跨膜转运蛋白,是氯离子共转运体家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物都有分布.NKCC能以1Na+∶1K+∶2Cl-的比例对离子进行跨膜转运,广盐性鱼类能在不同盐度胁迫时进行渗透压调节,维持细胞离子平衡,调节细胞体积,进而维持细胞渗透压,在恶劣的环境中继续生存[1].研究表明,当鱼体处于高渗环境中,其机体NKCC基因被激活,向体外分泌离子,维持渗透压平衡[2].NKCC基因的全长序列在底鱂(Fundulusheteroclitus)、欧洲鳗鲡(Anguillaanguilla)、罗非鱼(Oreochromisspp)等被克隆且其表达随盐度变化上调[3-5].甲壳动物中,在日本囊对虾(Penaeusjaponicas)、拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)、三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)等中克隆获得NKCC基因序列,并对其定位和在渗透压调节中的作用进行了研究[6-8].
中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis,Es)广泛分布在我国长江中下游的河流和湖泊中,是一种具有增养殖前景的经济甲壳动物[9],其具有一整套特殊的渗透压调节机制,能通过调节自身渗透压适应外界水体盐度变化[10-11],但尚未见全长NKCC基因在中华绒螯蟹个体中功能的报道.本实验成功克隆获得在中华绒螯蟹渗透压调节中发挥重要功能的NKCC全长基因序列并进行生物信息学分析,研究高盐度胁迫下不同时间点NKCC基因的表达,可为深入研究甲壳动物离子通道……
