黄伦辉，张嘉懿，李柳栩，张蓓，刘运德，李会强

[1.天津医科大学 医学检验学院，天津 300203；2．中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室， 国家血液系统疾病临床医学研究中心， 天津 300020；3.天津市儿童医院 检验科，天津 300074]

特异性IgE(specific IgE, sIgE)抗体在变态反应性疾病中处于核心地位，其生物功能是通过结合四聚体高亲和力IgE受体而介导的。目前，sIgE的检测是含量测定而非功能测定[1]，与临床症状相关性不高，因为sIgE水平仅仅表示IgE结合过敏原的强度，并不能反映结合过敏原引起的致敏细胞脱颗粒效应。

高亲和力IgE受体α链(high affinity IgE receptor alpha chain，FcεR1α)在RBL细胞上的表达可用于检测sIgE与过敏原结合所导致的组胺、5-羟色胺等炎性介质的胞吐[2]。目前，RBL报告系统有RS-ATL8和NFAT-DsRed，用于研究纯化的花生过敏原诱导脱颗粒的能力或检测食物过敏原[3-4]。这2种系统可实现高通量测量，后者也可以与过敏原阵列配合使用[5]，但均不能直接反映脱颗粒效应[6]。

Lang等[7]的研究发现，神经肽Y(neuropeptide Y，NPY)与荧光蛋白融合表达可用于标记神经元细胞系PC12中的颗粒。Azouz等[8]的研究证明，NPY-mRFP也可以用来标记非神经元RBL细胞中的颗粒，用于定量细胞胞吐。本研究假设稳定转染NPY-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)和FcεR1α的RBL细胞可以用于人类血清中致敏作用的检测，通过定量荧光释放率来评估致敏效应。

1 材料与方法

1.2 方法

1.2.1 基因表达载体的构建 通过NCBI网址查询获得FcεR1α、NPY-EGFP的基因序列，由义翘神州生物公司合成并构建质粒pLV-Puro-FcεR1α-T2A-NPY-EGFP-TYK2，对其进行测序鉴定后无内毒素大量提取。……