吕晶南，余方友

(1. 苏州大学第二附属医院检验科，江苏苏州215004；2. 同济大学附属上海市肺科医院检验科，上海 200082)

2019新型冠状病毒(2019-nCoV)的暴发，使分子生物学技术在临床感染性疾病诊断、治疗、疗效评价及预防等方面得到前所未有的重视和飞速发展。本文就近年来基于核酸检测技术鉴定病原体进行系统化讨论，同时也对这些方法在临床实验室应用时可能遇到的挑战和机遇进行阐述。

1 呼吸道感染

1.1病毒 呼吸道病毒的感染对全球流行病公共卫生可引起严重的威胁，如1918年甲型流感大流行，2003年严重急性呼吸系统综合征(SARS)冠状病毒暴发，2009年甲型H1N1流感引起的大流行，2012年阿拉伯半岛出现由冠状病毒引起的中东呼吸综合征(MERS)，2019年2019-nCoV的暴发。值得注意的是，仅基于体征和症状区分病毒来源较困难，同时不同病毒感染采取的治疗方案不同，因此，呼吸道病毒对人类健康构成严重威胁[1]。目前，食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的多重呼吸道病毒组合能够检测多达20种不同的病毒靶标[2]。

Luminex xMAP检测是一种基于多重RT-PCR的检测方法，采用多色荧光标记的微球(珠)杂交，可同时检测和鉴定12种呼吸道病毒和亚型[2]：首先通过多重RT-PCR扩增病毒的保守区域，然后通过含有生物素的脱氧核苷酸延伸反应，扩增产物被生物素标记，与颜色编码微球上的病毒特异性探针进行杂交，检测荧光信号。

Verigene系统(Nanosphere公司)通过PCR扩增结合纳米金颗粒标记的探针，与排列在载玻片上的捕获寡核苷酸靶序列进行杂交。……