顾 琴, 姬秋彦, 梁疆莉, 高 娜, 李婧妍, 蔡路奎, 史 荔, 孙明波, 马 艳

(中国医学科学院 北京协和医学院医学生物学研究所联合实验室，云南 昆明 650118)

白喉(diphtheria)是一种急性上呼吸道传染病，由革兰阳性白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheria)引起[1], 主要侵犯咽部形成灰白色假膜, 能产生强烈的外毒素, 通过血液循环将毒素扩散, 引起多种器官病变[2]。白喉一直是严重危害广大少年儿童身体健康的主要传染病之一[3], 起病急、进展快, 严重者可出现急性喉梗阻、神经麻痹、中毒性心肌炎、中毒性肾病等并发症而危及生命[4]。接种疫苗是预防白喉最有效、最经济的防控手段。白喉疫苗在研制及生产过程中，原始菌种需经多次传代，建立种子库，工作种子批菌种也需多次传代制备成疫苗。在此过程中，菌种可能会发生变异，从而引起生物学性状的改变。因此，研究菌种的遗传稳定性对于疫苗抗原的稳定性及疫苗的免疫效果有重要影响[5]。之前大多采用一代测序技术对菌种进行核酸序列测序分析基因突变，但一代测序成本高、通量低、无法大规模进行，因此出现了第二代测序技术(next generation sequencing, NGS)，NGS具有高通量、高速度、高分辨率和低成本等特点[6-7]。前期使用NGS对百日咳疫苗用菌株进行了遗传稳定性研究，取得较好的结果[8]。在此基础上，本研究采用NGS监测白喉棒状杆菌在传代建库及生产过程中白喉毒素结构基因的突变情况，并采用蛋白免疫印迹技术确证相关蛋白，为疫苗的质量研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种来源 白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheria)PW8株CMCC38007购自中国食品药品检定研究院。……