王珏, 胡丽丽, 李桂兰, 吴娜, 张育敏

山西中医药大学基础医学院, 山西 晋中 030600

植物病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins, PR)是植物体被病原体侵害及受到外界压力时产生的[1]。这些PR蛋白主要被划分为17个家族，具有广泛的功能[2]，其中PR-10不仅仅参与植物的抗病机制反应，同时在其自身发育中也起作用[3]。有文献指出蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10由158个氨基酸组成，理论大小为16.8 kD，且具有核酸酶活性[4-5]。并有研究证明，PR-10类蛋白的核酸酶活性可能在植物防御病原体感染中起作用，和其抗RNA类病毒相关[6]。因此体外研究AmPR-10的性能对深入探讨黄芪抗病机制具有重要意义，然而从天然黄芪中提取蛋白质的传统方法成本较高，蛋白得率较少，后续研究不便。

大肠杆菌表达体系遗传背景清楚、操作简便，对外源基因表达研究是一条高效、经济的途径[7]，但因其缺少蛋白质表达后的修饰体系，使来源于真核生物的外源基因表达后不能正确折叠，常以不溶的包涵体形式存在[8]。针对这一现象，目前有多种方式可提高外源基因的可溶性表达量，如与标签融合表达[9-10]、分子伴侣修饰表达[11-13]、提高周质蛋白表达[14]或更换宿主菌等[15-16]。本研究试图建立AmPR-10基因在大肠杆菌内的可溶性表达体系，选择融合标签以及分子伴侣修饰的方法以期高效表达具有活性的蒙古黄芪病程相关蛋白，为进一步探索AmPR-10核酸酶活性机制，研究蒙古黄芪生长发育抗病过程提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验材料 蒙古黄芪叶片(山西中医药大学种植)；……