绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因在溺死相关浮游生物检测中的应用

2021-03-30李欢徐曲毅刘超肖成赵建余仲昊杨幸怡李越万立华

法医学杂志 2021年1期

关键词：检测

李欢，徐曲毅，刘超，肖成，赵建，余仲昊，杨幸怡，李越，万立华

1.重庆医科大学基础医学院法医学教研室，重庆400016；2.广州市刑事科学技术研究所法医病理学公安部重点实验室，广东广州510442；3.南方医科大学法医学院，广东广州510515

水中尸体的溺死诊断是现今法医学鉴定中的热点问题，同时也是法医工作中面临的挑战性问题。由于人在溺死过程中，水中浮游生物可通过呼吸系统进入体循环，进而蓄积于肝、肾等器官，因此可通过检测溺死者这些器官中相关的浮游生物而建立溺死诊断方法。本研究针对绿藻ChlB基因和蓝藻NIES基因设计特异性引物，构建一种特异性较强、灵敏度较高的聚合酶链反应-毛细管电泳（polymerase chain reaction-capillary electrophoresis，PCR-CE）方法，同时比较微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜（microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscope，MD-VF-Auto SEM）方法，旨在扩大溺死相关浮游生物检测范围，提高溺死相关浮游生物的证据力。

1 材料与方法

1.1 常用仪器与试剂

2K15 高速冷冻离心机（美国Sigma 公司），Applied BiosystemsTMVeritiTM96 孔热循环仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司），3130xl基因分析仪（美国Applied Biosystems 公司），Qubit 2.0 荧光定量仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司），Thermomixer comfort®恒温混匀仪（美国Eppendorf 公司），Millipore纯水机（Mili-q，美国Millipore 公司），GeneMapperIDXv1.4（美国Thermo Fisher Scientific 公司），MW3000微波消解仪（奥地利Anton Paar 公司），Quanta 600 型扫描电镜（美国FEI 公司）。

PowerSoilTMDNA Isolation 试剂盒（美国MO BIO公司），蛋白酶K（20 mg/mL，美国Qiagen 公司），二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT；美国Thermo Fisher Scientific 公司），Qubit dsDNA HS Assay 试剂盒（美国Thermo Fisher Scientific 公司），甲酰胺和CC5 ILS500 内标（美国Thermo Fisher Scientific 公司），反应混合液（无锡中德美联生物技术有限公司），浓硝酸、30%过氧化氢（广州化学试剂厂）。