任长城，李玉明，刘沣，张玮豪，刘宇利

胶质瘤是常见的颅内肿瘤，主要的治疗手段包括手术切除及放化疗，但疗效不佳、复发率及死亡率均较高[1,2]。胶质瘤的发病机制未完全阐明，目前临床上也缺乏靶向治疗手段。微小RNA（microRNAs，miRs）是近年来受到关注的具有广泛基因表达调控作用的非编码小RNA，miRs 在转录后水平调节基因表达，且这一调节通常是一种网络调节方式，即一种miR可能调控多个靶基因，一种靶基因也可能同时受到多种miR 的调控。研究证实，多种miRs在胶质瘤病灶内异常表达[3,4]。杨妤等[5]的研究证实miR-129-5p在胶质瘤组织及胶质瘤细胞株中均呈低表达趋势，提示miR-129-5p 可能具有抗胶质瘤作用。胶质母细胞瘤的基础研究证实，miR-129-5p能靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶6（cyclin-dependent kinase 6，CDK6）并抑制肿瘤细胞增殖[6]。前列腺癌、乳腺癌基础研究证实，miR-129-5p 能靶向调控N-钙黏蛋白（N-cadherin）并抑制肿瘤细胞的上皮间质转化及迁移[7,8]。基于此，本实验分析过表达miR-129-5 对胶质瘤U87 细胞株增殖、迁移及CDK6、N-cadherin表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 胶质瘤U87 细胞购自中科院上海细胞资源中心。

1.1.2 主要试剂与设备 miR-129-5p mimic 及阴性对照（negative control，NC）mimic 购自上海吉玛公司，MTS细胞活力检测试剂盒购自美国Promega公司，兔来源CDK6、N-cadherin的单克隆一抗购自美国Abcam 公司，CDK6、N-cadherin 的野生型、突变型双荧光素酶报告基因及相应的检测试剂盒购自美国Promega公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 U87 细胞在含有10%胎牛血清的DMEM中贴壁培养，0.25%胰蛋白酶常规消化传代后，根据实验要求将细胞接种在不同规格的培养板中并分组处理：对照组用转染试剂转染NC mimic，miR-129-5p组用转染试剂转染miR-129-5p mimic。……