郑森元 刘芳 赫晓磊 张志强

作者单位：830054 乌鲁木齐 1新疆医科大学第一附属医院消化病二科；2新疆医科大学第五附属医院老年病科

食管鳞癌是食管癌最常见的分型，因临床症状不明显且缺乏早期诊断标志物，大部分患者确诊时往往已处于中晚期，即使术后患者预后也仍较差，5年生存率低于20%［1-4］。因此，探索食管鳞癌发生发展机制，寻找新型有效的诊断和治疗靶点至关重要。外泌体是一类由多种活细胞分泌的纳米级囊泡，稳定存在于体液中，可发挥细胞间信息传递的作用［5-6］，其中肿瘤细胞外泌体可在肿瘤微环境中调控免疫细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞而影响肿瘤的生长、转移、免疫逃逸、血管新生等［7-8］。多种外泌体miRNA已被报道能够通过调控血管内皮细胞功能而影响血管新生［9］，其中miR-130a可调控血管内皮细胞迁移及血管形成能力，且已有研究指出外泌体中miR-130a可调控胃癌血管新生［10］，然而其在食管鳞癌中的研究尚未见报道。本研究通过差速离心法提取食管鳞癌细胞的外泌体并探讨外泌体中的miR-130a在血管新生中的作用及机制，以期为食管鳞癌诊断和治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要材料及试剂

食管鳞癌细胞TE-13和Eca-109，食管上皮细胞HEEC，人脐静脉血管内皮细胞HUVEC均购自中科院上海细胞库；HiPerFect Transfection Reagent购自QIAZEN公司；miRNA cDNA合成试剂盒、EvaGreen miRNA qPCR MasterMix购自加拿大Abm公司；Matrigel胶、Transwell小室购自福麦斯生物技术有限公司；CD9、CD63、TSG101抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司；p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、GAPDH、山羊抗兔二抗购自沈阳万类生物技术有限公司；……