曹 阳， 陈 薇

病原微生物对抗菌药物耐药性的日趋增高是对全球人类健康的主要威胁，而对其快速检测、定量分析及结合抗菌药物管理，是控制耐药性出现和传播的关键干预措施。但目前临床微生物工作中使用更多的还是表型抗菌药物敏感性检测（antibiotic susceptibility testing，AST），多为肉汤微量稀释法、纸片法等。这些方法需要较长的孵育时间，不能及时指导抗感染治疗。近年来开发了一些新型的技术应用于耐药菌检测，现将相关的新兴检测技术综述如下。

1 分子生物学技术在耐药性检测中的应用

1.1 耐药基因核酸检测

现有多种新型耐药性检测的分子生物学方法，如核酸探针微阵列[1]，等温核酸扩增技术[2]，PCR扩增产物高分辨率熔解曲线分析，以及将菌种鉴定、熔解曲线和机器学习（machine learning technique）相结合的方法[3]。基于核酸扩增技术的耐药基因检测方法可以缩短报告时间，早期进行抗菌药物调整进行靶向治疗。有许多商品化仪器如全自动检测分析系统GeneXpert利用PCR技术可检测mecA和/或mecC基因，该系统还可以检测万古霉素耐药基因vanA和vanB以及针对直肠拭子中碳青霉烯类耐药基因KPC、NDM、VIM、OXA48 和IMP的筛查[4-6]，GeneXpert系统高度整合样品制备、扩增及检测于一个独立的试剂盒中，并将其自动化，只需很少的人工操作，但受荧光通道限制，通常只能同时报告2～6种靶标。近年来，数种新的多重扩增检测系统可以同时进行菌种的鉴定和耐药基因的检测。BioFire公司的 FilmArray BCID 检测系统采用巢式多重PCR的原理，将核酸提取、PCR扩增和产物检测集成到一个封闭的测试条中，可检出来自血培养中24种常见的菌血症病原菌和3种耐药基因mecA、vanA/B和KPC，该系统根据不同测试条组合，最多可同时报告43种病原体/耐药基因结果。……