梁雨欣，吴建祥，李小宇，张春雨，侯吉超，周雪平,，王永志,

马铃薯Y病毒衣壳蛋白抗原表位分析及其快速ELISA检测方法的建立

梁雨欣1,2，吴建祥3，李小宇2，张春雨2，侯吉超1，周雪平3,4，王永志2,4

1吉林农业大学植物保护学院，长春 130118；2吉林省农业科学院植物保护研究所，长春 130033；3浙江大学生物技术研究所，杭州 310058；4中国农业科学院植物保护研究所，北京 100193

【】马铃薯Y病毒（potato virus Y，PVY）是影响马铃薯产量和品质的主要病毒之一，目前尚未发现有效的防治药剂，脱毒种薯的应用是预防PVY危害的主要防治措施。建立灵敏度高、特异性强的PVY快速检测方法，为脱毒种薯质量控制提供技术支撑。将PVY衣壳蛋白（coat protein，CP）分段表达为有重叠部分的小段多肽，以其为抗原通过Western blot分析PVY-CP的抗原表位。以P/N值最大为标准，通过常规双抗夹心ELISA（DAS-ELISA）对识别不同抗原表位的单克隆抗体（monoclonal antibody，MAb）进行配对试验，筛选一组检测效果最优的配对单克隆抗体，并确认捕获抗体和检测抗体。通过方阵滴定法确定捕获抗体及检测抗体的最佳工作浓度，通过控制变量法确定检测抗体与抗原的最佳共同孵育时间。以不同浓度的PVY-CP蛋白为抗原，检验快速DAS-ELISA的灵敏度。以感染不同病毒的马铃薯样品为抗原，检测快速DAS-ELISA的特异性。同时通过快速DAS-ELISA与RT-PCR检测50份田间采集的疑似感染PVY的马铃薯样品，将二者结果相比较检验检测方法的符合率。运用建立的快速DAS-ELISA对不同株系PVY感染的马铃薯样品进行检测。利用PVY-CP的6条分段表达多肽筛选到一组能进行DAS-ELISA的配对单克隆抗体（9G6和3D3），并以这对单抗为基础建立了PVY快速DAS-ELISA检测方法。……