宣旭娴，盛子璐，解振强，黄雨晴，巩培杰，张川，郑婷，王晨，房经贵

vvi-miR172s及其靶基因响应赤霉素调控葡萄果实发育的作用分析

宣旭娴1，盛子璐1，解振强2，黄雨晴1，巩培杰1，张川1，郑婷1，王晨1*，房经贵1

1南京农业大学园艺学院，南京 210095；2江苏农林职业技术学院，江苏句容 212499

【】miR172是植物生长发育的重要调节因子，阐释vvi-miR172s及其靶基因应答赤霉素在葡萄果实不同组织发育过程中的作用，从miRNA角度认识GA调控葡萄果实发育的作用机制。以‘白罗莎里奥’葡萄为材料，以miR-RACE和PCR技术克隆vvi-miR172a/b/c/d的成熟体和前体序列，由psRNA Target软件预测vvi-miR172s的靶基因；利用RLM-RACE技术验证vvi-miR172s剪切靶基因的裂解作用及其作用位点；采用生物信息学软件对靶基因、靶蛋白进行系统进化、序列结构分析及亚细胞定位预测；通过在线软件PLANTCARE进行启动子作用元件分析；通过qRT-PCR和芯片数据分析vvi-miR172s和靶基因在不同器官、不同发育阶段的基因表达图谱，以及应答GA3在果实不同组织中的时空表达模式。克隆鉴定了vvi-miR172a/b/c/d的成熟体和前体序列，预测到和四个靶基因，验证到裂解产物及其裂解位点，证明它们为vvi-miR172s的真实靶基因。序列结构分析显示，均含有10个外显子和9个内含子，其motif元件的种类和数量相似，均含有两个排列顺序相近的AP2蛋白结构域，表明其结构和功能具有一定的保守性；且、和与杨树的亲缘关系较近，与大豆具有较高的同源性；靶基因蛋白二级结构均为-螺旋，可进一步折叠为稳定的三级结构；4个靶蛋白亚细胞定位主要位于细胞核内。启动子作用元件分析发现vvi-miR172c和中含有赤霉素响应元件，表明它们可能响应赤霉素调控葡萄生长发育；……