范光亮 周云飞 张志龙

胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，具有高发病率和高病死率的特点[1]。当前，临床上的治疗手段通常为手术切除、放疗和化疗，也有应用靶向治疗[2]。然而，胶质瘤的预后非常差，中位生存期仅10～15个月[3]，高级别胶质瘤预后更差。导致胶质瘤整体生存时间短、生活质量低的潜在原因，一般认为是胶质瘤的恶性侵袭和远处迁移[4]。因此，寻找有效的预后标志物有助于胶质瘤预后判断，可以进一步指导胶质瘤的治疗。文献报道miR-3653 对肝癌细胞的侵袭和迁移具有抑制作用[5]。本文探讨miR-3653对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取2017 年1 月至2019 年3 月手术切除的胶质瘤组织25 例，其中男15 例，女10 例；平均年龄（62.96±5.86）岁；WHO分级Ⅱ级3例，Ⅲ级13例，Ⅳ级9 例；所有病人术前均未行抗肿瘤治疗，切除胶质瘤及瘤旁2 cm处脑组织，放入液氮保存。

1.2 细胞培养 将TG905细胞从液氮中取出，37 ℃快速融化，置于含10%胎牛血清（美国Gibco 公司）的DMEM培养基（美国Gibco公司）中培养，待细胞长至80%的融合度时，进行传代处理，培养3～4代后，取对数生长期细胞进行后续实验。

1.3 瞬时转染 待细胞融合度达到60%以上时，使用LipfectamineTM 2000（美国Invitrogen 公司）进行转染，严格按照说明书进行操作。过表达组转染MiR-3653 mimic 质粒，过表达对照组转染NC-MiR-3653 mimic质粒，抑制对照组转染NC-MiR-3653 inhibitor质粒，抑制组转染MiR-3653 inhibitor 质粒，miR-3653+ZEB2 过表达组同时转染miR-3653 mimic 和ZEB2 mimic质粒。

1.4 实时定量PCR 检测mRNA 表达 使用TRIzol 法提取胶质瘤组织总RNA，使用cDNA 反转录试剂盒（美国Invitrogen公司）反转录为cDNA，以U6和GAPDH 为内参。U6 引物：正义链5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反 义 链5'-AACGCTTCACGAATT TGCGT-3'；GAPDH 引物正义链5’-TGTAGTTGAGGTCAATGA AGGG-3'，反义链5'-ACATCGCTCA GA CACCATG-3'；miR-3653 引物 正 义 链5'-TCTCCCGAG AGACATATTT-3'，反义链5'-GATGAGAAGGTATGAATCA-3'。……