梁秋妍 郑红梅 付劲蓉 刘丽娟 张晓波 钱莉玲 周玉峰,2

儿童哮喘是一种慢性炎症性气道疾病，严重影响患儿的身心健康，其发病机制目前尚未完全明确[1]。1990至2010年，我国<14岁儿童哮喘的累积患病率上升了2.8倍[2]，这一现象无法用DNA序列的改变来解释，表观遗传学机制在其中发挥了重要作用[3, 4]。表观遗传学是不依赖DNA序列变化、由染色质改变产生、可稳定遗传的表型，包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA等。

环状RNA(circRNA) 是一种经特殊剪切而产生的共价闭合环状内源性非编码RNA，在真核细胞中广泛表达[5, 6]。环状RNAcircHIPK3(hsa_circ_0000284)/circHIPK3(mmu_circ_0001052)是来源于HIPK3基因的一个环状RNA[7]。有文献报道[8]，circHIPK3在过敏性鼻炎中上调，并通过靶向miR-495促进Th2细胞的分化来影响过敏性鼻炎的鼻部症状。因为T细胞分化在哮喘的发病过程中也起着极其重要的作用，因此推测circHIPK3可能在哮喘中也发挥重要作用，本研究旨在检测circHIPK3在哮喘患儿和哮喘小鼠模型的表达，并进行相关性分析研究。

1 方法

1.1 伦理和知情同意 本研究的实验方案获得复旦大学附属儿科医院(我院)伦理委员会批准(复儿伦审[2016]141号)。本研究获得哮喘组患儿和对照组儿童家长的口头知情同意，采血用于本研究检测。

1.2 哮喘组纳入和排除标准 纳入2017年8月11日至2019年8月5日在我院呼吸科门诊诊断为哮喘的患儿，诊断标准参照2016版《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[2]。排除合并其他呼吸道疾病(如肺炎)、 心血管系统疾病、神经系统疾病者。

1.3 对照组纳入和排除标准：为我院健康体检门诊的体检儿童，排除有过敏史及近期呼吸道感染者。

1.4 外周血单个核细胞(PBMCs)提取 采用密度梯度离心法，操作参考文献[9]。

1.5 小鼠哮喘模型的构建和肺组织提取 采用6～8周龄SPF级C57BL/6品系雌性小鼠(上海斯莱克实验动物公司)，饲养于SPF级实验动物房，操作遵守实验动物伦理原则。……