许丽洁 韩 鹏 吴美兰 宣志红#

1 诸暨市中医医院 浙江 诸暨 311800

2 浙江景岳堂药业有限公司 浙江 绍兴 312025

中药配方颗粒是在遵循传统中医理论的基础上，以符合炮制要求的中药饮片为原料，经工业化的提取、浓缩、干燥、制粒和分装等现代中药生产工艺过程精制而成的颗粒剂[1]。它既保证了原中药饮片的全部特征，能够满足中医师进行辨证论治、随证加减，同时又具有不需要煎煮、直接冲服、服用量少、疗效确切、药效高、药性强、安全卫生、携带保存方便等许多优点，市场前景广阔[2]。中药配方颗粒在临床应用中是单味药物独立提取后的混合，而传统汤剂是群药共煎。中药汤剂在煎煮时有相须、相杀、相畏等作用，会经过一系列相当复杂的物理化学反应，可增强疗效，也可降低毒性或不良反应，反应中产生的新成分也可能会起到一定的作用。中药配方颗粒不具备群煎过程，混合后的整体疗效有可能会受到影响[3-6]。本研究将不同配比（2∶1、1∶1、0.5∶1）的当归熟地药对合并煎煮，制成以中药药对混合投料的颗粒剂（简称“当归熟地药对配方颗粒”），其煎煮次数、时间与单煎一致，加水量与各单煎的总量相同。对当归熟地药对配方颗粒冲泡后药液和单味配方颗粒混合冲泡后药液中阿魏酸、毛蕊花糖苷含量进行比较，为当归熟地药对配方颗粒的研究提供一定的思路和基础。

1 材料

1.1 仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪；智能超声波清洗器（DL-480E）；BT125D型电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

1.2 试剂：阿魏酸（批号110773-201614，99.0%），毛蕊花糖苷（批号111530-201713，92.5%），购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、冰乙酸为分析纯；水为纯化水。

1.3 样品：当归熟地药对配方颗粒和当归、熟地配方颗粒由浙江景岳堂药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 阿魏酸含量测定的方法学验证[7]：分述如下。

2.1.1 色谱条件：色谱柱为UltimateAQ-C18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）；流速为1.0ml/min；检测波长 316nm；柱温35℃；进样量10μl。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

2.1.2 对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每亳升含14μg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，即得。

2.1.4 专属性验证：取当归熟地配方颗粒（1∶1）（批号：DS-04）研细，按“供试品溶液的制备”方法制成供试品溶液。取熟地配方颗粒研细，取0.2g，精密称定，按“供试品溶液的制备”方法制成阴性供试品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果对照品色谱中，阿魏酸色谱峰理论塔板数为96805，对称因子为1.243。供试品色谱图上阿魏酸峰理论塔板数为97711，对称因子为1.223。阴性供试品在该时位置无干扰。说明该方法专属性良好。相关色谱图见图1～3。

图1 阿魏酸对照品色谱图

图2 当归熟地药对供试品色谱图

图3 当归熟地药对阴性样品色谱图

2.1.5 进样精密度：取阿魏酸对照品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积。结果RSD为0.53%，说明仪器精密度良好。

2.1.6 线性关系的考察：精密吸取各浓度对照品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果得线性方程Y=57241X-528.43，相关系数R2=0.9999。说明阿魏酸在浓度1.391～27.82μg/ml之间线性关系良好。

2.1.7 重复性：平行称取6份样品，按“供试品溶液的制备”操作，照含量测定项下的方法测定，所得6份的含量RSD为1.05%，说明该方法重复性良好。

2.1.8 回收率：取本品适量，研细，取0.1g药对配方颗粒，精密称定，平行9份，分别加入不同量的对照品溶液，其余操作同供试品溶液的制备，测定含量，计算回收率。结果阿魏酸的回收率均在95%～105%之间，表明该方法回收率良好。

2.1.9 结果：经方法学验证，该方法专属性、进样精密度、线性、供试品稳定性、重复性、中间精密度、回收率均良好，可用于当归熟地药对中阿魏酸含量测定。

2.2 毛蕊花糖苷含量测定的方法学验证[7]：分述如下。

2.2.1 色谱条件：色谱柱为WondaSil C18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）；流速为1.0ml/min；检测波长334nm；柱温35℃；进样量10μl。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

2.2.2 对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升含10μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性验证：取当归熟地配方颗粒（1∶1）研细，按“供试品溶液的制备”方法制成供试品溶液。取当归配方颗粒研细，精密称取0.5g，按“供试品溶液的制备”方法制成阴性供试品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，考察专属性。结果对照品色谱中，毛蕊花糖苷色谱峰理论塔板数为8105，对称因子为1.054。供试品色谱图上毛蕊花糖苷峰理论塔板数为6239，对称因子为1.180。阴性供试品在该时位置无干扰。说明该方法专属性良好，可用于该药对中毛蕊花糖苷含量测定。色谱图见图4～6。

图4 毛蕊花糖苷对照品色谱图

图5 当归熟地药对供试品色谱图

图6 当归熟地药对阴性样品色谱图

2.2.5 进样精密度：取毛蕊花糖苷对照品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积。结果RSD为0.86%，说明仪器精密度良好。

2.2.6 线性关系的考察：精密吸取各不同浓度对照品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果得线性方程Y=27717X+200.86，相关系数R2=0.9999。说明毛蕊花糖苷在浓度1.182～23.64μg/ml之间线性关系良好。

2.2.7 重复性：平行称取6份样品，按供试品溶液的制备方法制备样品，照含量测定项下的方法测定，所得6份含量RSD为1.35%，说明该方法重复性良好。

2.2.8 回收率：取本品适量，研细，取0.25g药对配方颗粒，精密称定，平行9份，分别加入不同量的对照品溶液，其余操作同供试品溶液的制备，测定含量，计算回收率。结果毛蕊花糖苷的回收率均在95%～105%之间，表明该方法回收率良好。

2.2.9 结果：经方法学验证，该方法专属性、进样精密度、线性、供试品稳定性、重复性、中间精密度、回收率均良好，可用于当归熟地药对中毛蕊花糖苷含量测定。

2.3 “中药药对”单味配方颗粒混合冲泡与“中药药对配方颗粒”冲泡含量比较：取相当于9g饮片的当归配方颗粒、熟地配方颗粒按2∶1、1∶1、0.5∶1三种配比混合冲泡。同时将相应配比的当归熟地药对配方颗粒进行冲泡。用高效液相色谱测定两者阿魏酸和毛蕊花糖苷含量，比较两者差异。结果以每相当于1g饮片计，测定结果见下表1、表2。结果表明，中药药对配方颗粒冲泡后药液中阿魏酸和毛蕊花糖苷的含量均略高于单味配方颗粒混合冲泡后的药液中的含量，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 单味配方颗粒与中药药对配方颗粒冲泡后阿魏酸含量测定结果（±s，mg/g）

表1 单味配方颗粒与中药药对配方颗粒冲泡后阿魏酸含量测定结果（±s，mg/g）

中药药对配方颗粒0.2627±0.0104 0.1827±0.0067 0.1602±0.0056配比当归熟地（2∶1）当归熟地（1∶1）当归熟地（0.5∶1）单味配方颗粒混合0.2539±0.0067 0.1927±0.0039 0.1405±0.0041

表2 单味配方颗粒与中药药对配方颗粒冲泡后毛蕊花糖苷含量测定结果（±s，mg/g）

表2 单味配方颗粒与中药药对配方颗粒冲泡后毛蕊花糖苷含量测定结果（±s，mg/g）

中药药对配方颗粒0.0521±0.0017 0.0763±0.0041 0.1170±0.0062配比当归熟地（2∶1）当归熟地（1∶1）当归熟地（0.5∶1）单味配方颗粒混合0.0452±0.0013 0.0659±0.0024 0.0890±0.0027

3 讨论

药对又称对药、对子药、姐妹药，在文献中没有统一的定义。现代医学通常认为，药对是中医临床常用的相对固定的两味药物的配伍组合，是历代医家长期临证的经验总结，也是中药配伍应用中的基本形式。其药简、其理奥、其力专，配合默契，用之中的。在临床应用中具有较强的针对性、灵活性和适应性[8]。当归与熟地是中药临床比较常用的药对，《本草正》中记载：“熟地黄性平，气味纯净，故能补五脏之真阴，而又于多血之脏为最要……诸经之血虚者，非熟地不可。”当归甘补质润，辛散温通，入肝、心、脾经，善能补血，又能活血，尤为妇科调经良药。凡一切血虚血瘀之证，月经不调，经闭痛经；虚寒腹痛，跌打损伤，瘀血作痛，痹痛麻木，痈疽疮疡；以及血虚肠燥便秘等皆可用。二药合用，相须配伍，共奏滋补阴精、养血调经之功。当归熟地药对体现了中药相须的相互作用，十分具有代表性[9]。

本研究运用高效液相色谱法，分别测定单味配方颗粒混合后冲泡与“中药药对配方颗粒”冲泡后各组分的化学有效成分。考察中药药对所含配方的单味颗粒混合后冲泡与“中药药对配方颗粒”冲泡在化学有效成分上的差异，结果表明，“中药药对配方颗粒”中有效成分的含量高于单味配方颗粒混合冲泡后药液中的含量，提示当归熟地药对的物质基础并不完全是由单味药的物质基础决定的。中药配伍在煎煮过程中由于各类型化合物间的相互作用可能影响其化学成分的转移及溶出，从而促进有效成分的溶出。本研究探索了“中药药对”合煎获得的“中药药对配方颗粒”作为中药基础配伍的可行性与必要性，为中药配方颗粒的发展探索新的方向。