郭登方 王若涛 黄建成 王瑞华 张扬平 张春

(福建医科大学附属宁德市闽东医院 1普外科，福建 宁德 355000；2检验科)

尽管近年来治疗肝细胞癌(HCC)的方法有大幅度改善〔1,2〕，但终末期HCC患者死亡率依然很高，且HCC早期诊断率低，一经发现多已进入HCC终末期，极易扩散，使HCC治愈变得异常艰难〔3〕，因此寻找新的治疗途径变得非常迫切。姜黄素是一种从姜黄根茎中提取的天然化合物，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗纤维化等多种药理作用，且对人体毒性小〔2〕。姜黄素衍生物-4(4-甲基-3氧基苯甲基，C086)是一种新合成的姜黄素衍生物，其生物活性优于姜黄素，具有良好抗突变和抗肿瘤作用〔4〕。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路是一种重要的凋亡抑制通路，在肿瘤细胞的增殖、活化和迁移等方面发挥重要调控作用〔5〕。本研究利用C086处理HCC HepG2细胞，拟观察C086对HCC HepG2细胞凋亡的影响并初步探究其作用机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂及仪器 人HepG2细胞系购自美国ATCC，RPMI1640培养基(批号：11875193)、胎牛血清(FBS，批号：10099-145)购自美国Gibco公司；姜黄素C086(批号：20180305，纯度≥98.5%)购自北京索莱宝生物科技有限公司；二甲基亚砜(DMSO，批号：ST038)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂盒(批号：C0009)、细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(批号：P0028)、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒(批号：P0010S)、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(批号：C1062S)购自上海碧云天；鼠源一抗β-actin抗体、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2抗体、 Bcl-2相关X蛋白(Bax)抗体、PI3K抗体、p-PI3K抗体、AKT抗体、p-AKT抗体、细胞色素(Cyt)C抗体，二抗羊抗鼠IgG(批号：B-2752)均购自美国Invitrogen；酶标仪、5%CO2培养箱购自美国Thermo Fisher；流式细胞仪购自美国BD；倒置显微镜购自日本Olympus等。……