李海燕 杨丽丽 郭璞 柴娟

(1西安医学院医学技术学院，陕西 西安 710000；2西安市中医医院肛肠科；3 西安医学院口腔学院)

肝纤维化是在各种类型慢性肝损伤病因作用下，肝脏组织发生的一种损伤修复反应,其主要特点是细胞外基质(ECM)过度沉积〔1〕。若肝纤维化得不到有效控制，最终会进展为肝硬化，甚至肝癌。ECM的主要来源是活化的肝星状细胞(HSC)，因此HSC的活化是肝纤维化病理机制中的核心事件〔2〕，但关键分子机制尚不明确。CD147 属于免疫球蛋白超家族(IgSF)成员，以往研究中CD147在肝纤维化组织中高表达，并在HSC活化中发挥重要作用，其功能与糖代谢有一定相关性〔3〕。而已有研究发现，在肝纤维化的病理过程中，活化的HSC依赖于糖酵解供能〔4〕。本研究旨在探讨糖酵解是否在HSC活化中发挥了重要作用及CD147是否通过糖酵解作用活化HSC，从而对肝纤维化发生发展的机制研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1细胞和试剂 人HSC系LX-2由中科院上海细胞库提供； CD147 siRNA(上海吉玛制药技术有限公司)、转化生长因子(TGF)-β1(美国 Sigma公司)、Galloflavin(美国 Sigma公司)、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒(美国 Pierce公司)、乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒(美国 Peprotech公司)，鼠抗人CD147、α-平滑肌动蛋白(SMA)、α-tubulin抗体(美国 Abcam公司)。

1.2转染LX-2细胞系细胞培养及si-CD147 转染细胞 将LX-2细胞接种于6孔板(2×105个细胞/ml)，孵育于10% 胎牛血清的 RPMI1640培养基，放置于5% CO2恒温培养箱(37℃)。转染前以无血清培养液饥饿24 h，将si-CD147转染入对数生长期LX-2细胞，阴性对照组转染snc-RNA。转染步骤按照LipofectamineTM2000脂质转染试剂盒说明书操作。

1.3LX-2细胞处理及分组 为了验……