柱前衍生-高效液相色谱测定手足口病患者血清中多胺水平
2021-03-22张伟健曾今诚黄明元广东医科大学东莞市环境医学重点实验室东莞市生物活性分子开发与转化研究重点实验室广东东莞53808
张伟健,谢 琪,,曾今诚,黄明元*(广东医科大学 .东莞市环境医学重点实验室,.东莞市生物活性分子开发与转化研究重点实验室,广东东莞 53808)
多胺是一类含氮的低分子量有机化合物,具有生物活性,一般包括亚精胺(SPD)和精胺(SPM),它们具有促进细胞分化、增生、生长,在调节核酸与蛋白质的合成及生物膜稳定性等方面起着重要的作用[1]。体内 SPD和SPM水平与恶性肿瘤、心血管疾病、脑血管疾病等疾病的发生发展密切相关[2-4]。目前多胺检测在红斑狼疮[5]、恶性肿瘤患者中均有报道[6],主要采用高相液相色谱法(HPLC)[7]。手足口病(HFMD)是一类由肠道病毒感染引起的一种发生于5岁以下儿童中的常见疾病[8]。本实验采用柱前衍生-HPLC测定手足口患儿和健康体检者血清多胺的浓度,旨为临床诊断和疾病预防提供参考。
1 材料和方法
1.1 仪器与试剂
LC-20A高效液相色谱仪、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱、RF-20A xs荧光检测器(Shimadzu),5417R冷冻高速离心机(Eppendorf),氮吹仪REXC100,电动旋涡混旋震荡器 Vortex-Genie2,Milli-Q超纯水仪(Millipore),电热恒温水温箱(精宏公司);亚精胺标准品、精胺标准品和丹磺酰氯均购于sigma公司;乙腈为色谱纯,氨水、高氯酸、NaOH、NaHCO3等均为分析纯。
1.2 标准溶液配制
准确称取亚精胺和精胺标准品100 mg,用超纯水定容至10 mL,放置-20℃冰箱保存;用超纯水分别稀释以上标准品为1 g/L,混合以上单标,再用冷5%高氯酸稀释成终溶度分别为 20、10、4、2、1、0.5、0.1、0.02 mg/L的混合标准溶液,置于 4℃冰箱保存。
1.3 样本收集与前处理
根据中国卫生部于2018年发布的《手足口病治疗指南》和粪便手足口病病毒检测阳性诊断结果,收集手足口病患儿(20例)和同期健康体检者(20例)的血清。……
