刘静怡 苏姗娜 何慧洁 王慧敏 张冬

肺癌是全球癌症死亡的主要原因[1]，随着工业化、城市化及环境污染肺癌病因也变得更加复杂，由于早期临床表现缺乏特异性，同时缺乏敏感的筛查指标，大部分患者明确诊断时已处于晚期，失去手术治疗的机会，同时放疗、化疗毒副作用较大，不能高度特异性地杀伤肿瘤细胞，且容易复发和远处转移，故患者的预后较差[2]。Cullin1蛋白是Cullin家族的一员，目前在人类基因组中，Cullin蛋白家族共有8个成员，Cullin1为SCF复合体（Skp1-Cul-F-box）的重要组成部分，可介导参与细胞周期进程中许多蛋白质的蛋白酶体的降解，一旦Cullin1的调节机制发生异常，SCF复合体功能也相应发生变化，使癌细胞发生积累或肿瘤抑制因子的过度降解，导致细胞的恶性转化和肿瘤发生[3,4]。近年来研究表明Cullin1与恶性肿瘤的生物学行为密切相关，已有研究表明在肾癌、乳腺癌、结肠癌中异常表达[5-7]，而肺癌中少有报道，本研究拟探讨Cullin1对肺腺癌A549和H1395细胞生物学特性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 肺腺癌细胞（A549、H358、H1395、H1650）及人正常肺上皮细胞BEAS-2B（中国科学院干细胞库），RPMI-1640培养基、0.25%胰酶（美国Hyclone公司产品）、胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），TRIzol试剂（上海Invitrogen公司），siRNA Cullin1（上海吉玛制药技术有限公司），Lipofectamine 2000转染试剂（赛默飞世尔科技公司），四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium assay, MTT）试剂（北京中杉金桥生物技术公司），Transwell（上海碧云天公司），基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）抗体、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9, MMP-9）抗体、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1, TIMP-1）抗体、Cyclin D1抗体、Cyclin E2抗体、p21抗体、p27抗体（上海贝晶生物技术……