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环孢素A联合淋巴细胞主动免疫对URSA患者血清T细胞亚群、激素水平及ACA抗体水平的影响

2021-03-18

右江民族医学院学报 2021年1期
关键词:母体淋巴细胞胚胎

(河南省鹤壁市人民医院妇产科,河南 鹤壁 458030)

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是临床上常见的病理性妊娠疾病,发生2次或2次以上的流产大约占生育期妇女的5%,发生3次或3次以上的流产约占1%,大约50%的RSA患者病因不明,称之为原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)[1]。RSA发病机制和病因尚不明确,可能与生殖免疫功能紊乱、内分泌异常、遗传因素、感染等因素相关。目前临床上对RSA病因明确的患者采用针对性治疗,但对URSA的患者常以传统经验进行治疗[2]。淋巴细胞主动免疫(lymphocyte immunotherapy,LIT)是通过抑制母体对胎儿免疫排斥反应,对URSA疾病具有一定疗效。环孢素A环孢素(cyclosporine,CsA)具有抑制自身免疫反应的效果,通过母体对胚胎排斥反应进行抑制,使滋养细胞生长,进而达到治疗目的[3]。鉴于此,本文旨在观察CsA和LIT联合使用对URSA患者的疗效,现将结果报告如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我科2017年10月—2019年10月期间87例URSA患者作为研究对象,根据随机数字表法分组,分为对照组和观察组。对照组43例,年龄在24~30岁,平均(27.01±1.20)岁,流产次数2~4次,平均(3.00±0.14)次;观察组44例,年龄在25~31岁,平均(28.00±1.21)岁,流产次数3~5次,平均(4.01±0.12)次。纳入标准:所有患者均符合RSA诊断标准[4],经检查未明确发病机制为URSA,染色体正常,经宫腔镜检查宫腔形态正常。所有患者及家属知情并签订知情同意书,经我院医学伦理委员会同意。排除标准:合并心肾肝功能异常、恶性肿瘤、免疫性系统疾病、精神疾病、生殖器官异常、严重感染,对本研究药物过敏者。两组患者一般资料对比,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法 两组患者均以低分子肝素钙为基础治疗,低分子肝素钙注射液(生产厂家:Sanofi Winthrop Industrie,国药准字:J20040119,规格:0.6 ml)皮下注射,每次4000 IU,1次/天,持续治疗至妊娠3个月后。对照组给予LIT治疗,采取丈夫空腹静脉血15~30 ml,将25 ml肝素钠和25 ml生理盐水加入血液中,采用Ficoll密度梯度离心,分离出淋巴细胞,使用无菌生理盐水洗涤3次,将其制作成淋巴细胞悬液,细胞浓度调整为(3~4)×107个/毫升。在患者前臂内侧注射淋巴细胞悬液6~8点,0.2~0.3毫升/点,每次间隔3~4周治疗1次,4次为1个疗程。观察组在此基础上增加CsA治疗,环孢素软胶囊(生产厂家: 仙乐健康科技股份有限公司,国药准字:H20058147,规格:25 mg)口服,2~4 mg/kg,2次/天,从月经结束开始服用至月经来潮停止服用,妊娠第10周停止服用,定期检查血CsA含量,药物浓度维持在90~150 mg/L。

1.3 观察指标 ①血清T细胞亚群:治疗前后分别抽取患者空腹静脉血3 ml置于肝素钠抗凝管内离心,分离血清,采用美国BD公司FACS Calibur流式细胞检测仪检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。②激素水平:治疗前后分别抽取患者空腹静脉血2~3 ml置于促凝管内以3000 r/min,10 min离心,分离血清,采用化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素(HCG)、孕激素(P)、雌二醇(E2)。③抗心磷脂抗体(ACA)水平:治疗前后抽取患者静脉血分离血清,采用酶联免疫吸附法检测ACA-IgM、ACA-IgG水平。④不良反应:在治疗过程中观察并记录患者出现恶心呕吐、出血、皮周感染不良反应及不良反应发生率。⑤妊娠结局:记录两组患者临床妊娠率、早期流产率。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后血清T细胞亚群水平对比 治疗前两组患者T细胞亚群水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组CD8+低于对照组,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 T细胞亚群水平对比

2.2 两组患者治疗前后激素水平对比 治疗前两组患者激素水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组HCG、P、E2水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。见表2。

表2 激素水平对比

2.3 两组患者治疗前后ACA抗体水平对比 治疗前两组患者ACA抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组ACA-IgM、ACA-IgG水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。见表3。

表3 ACA抗体水平对比

2.4 两组患者不良反应及妊娠结局对比 观察组发生恶心呕吐2例,出血1例,皮周感染2例,其不良反应发生率为11.36%;对照组发生恶心呕吐2例,出血1例,皮周感染1例,其不良反应发生率为9.30%;两组患者不良反应发生对比,差异无统计学意义(χ2=0.001,P=0.971)。观察组临床妊娠率为81.82%(36/44),早期流产率为4.55%(2/44);对照组临床妊娠率为46.51%(20/43),早期流产率为23.26%(10/43);两组对比差异有统计学意义(χ2=11.820,P<0.001;χ2=6.403,P=0.011)。

3 讨论

RSA属于一种不育症,在妇产科较为常见,也是妊娠期妇女的并发症之一,大多数患者发病原因尚不明确,称为URSA。有研究显示,URSA患者可能与父亲染色体异常、内分泌疾病、微量元素缺乏、ACA抗体综合征等因素相关,但50%的RSA患者与免疫系统疾病相关[5]。T细胞在自身免疫系统中具有重要作用,妊娠期缺少可造成母亲对胚胎的免疫耐受力降低,进而刺激免疫系统对胚胎进行攻击,最终导致流产。发生辅助性T淋巴细胞和调节性T淋巴细胞表达紊乱时,会高度出现URSA疾病。母体和胚胎的免疫耐受遭遇破坏等多种免疫因素是造成URSA疾病发生的最关键原因[6]。因此,在母体建立良好的免疫耐受环境,防止蜕膜免疫应答、保护胚胎是妊娠成功的最重要治疗前提。

URSA患者在妊娠过程中,免疫调节机制会产生巨大变化,使免疫抑制作用增强,免疫排斥反应减低;在正常状态下,免疫排斥反应和免疫抑制作用应处于平衡状态,如两者失衡,母体免疫功能将发生异常,出现流产情况[7]。本研究显示,对照组HCG、P、E2均高于治疗前,低分子肝素钙通过对血管内皮生长因子1受体调节,可降低血管舒张压和收缩压,提高子宫内血流灌注,促进胎盘血管生成;其还具有免疫调节的作用,可调节滋养细胞增殖和侵袭力,调控滋养细胞凋亡进程中的关键酶活性,降低血液中自然杀伤细胞,起到保护胚胎和血管重塑作用,进而使患者孕激素水平提高[8-9]。本研究显示,对照组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于治疗前,CD8+低于治疗前,LIT可维持患者机体正常免疫状态,是通过反复注射丈夫外周血淋巴细胞,对母体免疫功能刺激生成耐受环境,产生有助于胚胎存活的封闭抗体,抗体水平提高可改善妊娠结局。其通过抑制NK细胞和T细胞毒性,降低免疫系统反应,提升抑制性细胞的分泌,利于降低母体对胚胎的免疫损害,增强胚胎免疫保护,助于妊娠成功。LIT还可抑制细胞毒性CD8+细胞和反应性CD4+细胞的活化、效应功能,进而抑制母体对胚胎的免疫排斥反应,改善妊娠结局[10-11]。对照组采用LIT和低分子肝素钙治疗,可改善患者免疫功能、孕激素水平,但对ACA抗体水平改善不显著。

本研究显示,观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、HCG、P、E2高于治疗后对照组,CD8+低于对照组,CsA是一种强效免疫抑制剂,其对T淋巴细胞亚群具有选择性抑制作用,可有效抑制辅助性T淋巴细胞活性。通过抑制HLA-II抗原和静止期Th细胞的分化,降低Th细胞的释放、淋巴因子的分泌合成,促使活化T淋巴细胞减少;通过抑制Ts细胞和Th细胞增殖分化,使钙调磷酸酶活性降低,进而降低淋巴细胞对胚胎的浸润,减低T细胞诱导的免疫反应[12-13]。除此之外,其还对抗原提呈细胞抑制,如巨噬细胞、B细胞、树突状细胞表面刺激因子的表达,调节Th1、Th2细胞因子的平衡,进而抑制细胞免疫效应,诱发免疫耐受,维持妊娠[14]。ACA抗体在病理状况下心磷脂分子将转移到外层结构,被自身免疫系统识别出,诱发一系列免疫反应,对血管内皮细胞造成损害。治疗后观察组ACA-IgM、ACA-IgG水平均低于对照组,在早孕期给予适量的CsA可提高滋养细胞生长能力,改善滋养细胞形态,加强其侵袭力和运动力;其还对母体对胚胎抗原的免疫排斥具有抑制作用,在母胎免疫调节过程中具有双重调节效果,进而降低ACA抗体水平[15]。本结果显示,观察组不良反应高于对照组,无统计学差异,提示药物安全性高;临床妊娠率高于对照组,有统计学差异,经调节T淋巴细胞、改善子宫内血流灌注和提高孕激素,进而提升临床妊娠率。

综上所述,CsA联合LIT通过抑制T淋巴细胞毒性和调节Th1、Th2辅助性细胞因子比例对URSA患者治疗,可有效改善免疫功能,提高孕激素水平,降低ACA抗体水平,提高妊娠率,药物安全性高。

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