严灵剑

摘要 从原生质体获取、纯化、培养、分裂和活性鉴定五个方面，深入解读了近几年浙江选考题中涉及原生质体的疑难问题。

关键词 原生质体 教学疑难 生物选考

中图分类号 G633.91

文献标志码 B

原生质体研究的热潮开始于20世纪80年代早期，并在随后的几年中逐步深入。目前，包括园艺植物在内的近400种植物已成功实现原生质体的分离。而且高等植物的原生质体已广泛的用于细胞融合、摄入外源DNA、细胞器、细菌或病毒颗粒等研究。在浙江省的选考试题中会经常出现原生质体的影子。

1原生质体是否一定要用纤维素酶和果胶酶来获取

分离原生质体常用的酶有果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶。一般来说，分离叶肉细胞和悬浮细胞的原生质体时只需纤维素酶和果胶酶即可。纤维素酶消化细胞壁的纤维素，果胶酶主要降解中胶层。分离愈伤组织原生质体时，加上半纤维酶来降解细胞壁中的半纤维素，分离效果会更好，酶的用量和酶解时间需适当增加。由此可见，原生质体的取材来源直接决定了所需酶的种类。

[例1]（2016年浙江选考T32）（节选）（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L甘露醇（维持较高渗透压）的的混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。

分析：这题是从叶片进行处理来获得原生质体，类似于从叶肉细胞中分离原生质体，所以要加纤维素酶和果胶酶。

参考答案：纤维素酶和果胶酶。

2原生质体为什么要纯化及如何纯化