张誓伟，赵杰菲，贺显君，乔莹，睢志向，宋彦

(1南阳市第二人民医院神经内科，南阳 473000；2商丘市第一人民医院神经内科，商丘 476000；3南阳理工学院外国语学院，南阳 473000；4河南省宁陵县人民医院神经内科，商丘 476700)

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种以进行性记忆功能减退和认知功能障碍为主要临床表现的神经退行性疾病，其主要病理特征为β‐淀粉样蛋白（β‐amyloid protein，Aβ）沉积、神经炎纤维缠结（neuro fibrillary tangle，NFT）及神经元缺失[1]。研究表明线粒体自噬与帕金森以及AD等中枢神经系统疾病的发生有关。AD中Aβ诱导产生的过量活性氧自由基和钙离子（Ca2+）可引发线粒体自噬和神经元能量代谢紊乱[2,3]。Toll样受体4（Toll‐like receptor 4，TLR4）是一种跨膜受体，参与小胶质细胞等神经细胞的自噬过程，并通过参与Aβ诱导的神经炎性反应，介导AD的发生、发展[4]。有研究发现下调TLR4的表达能够促进血管内皮细胞线粒体膜电位的升高，减少线粒体自噬损伤及细胞凋亡的发生[5]。目前尚未发现TLR4与AD细胞线粒体自噬损伤相关性的报道。本研究采用Aβ25‐35诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞株PC12细胞构建AD细胞模型，通过TLR4短发夹RNA（shRNA）慢病毒感染PC12细胞干扰TLR4的表达，观察AD细胞的存活率、凋亡、线粒体膜电位及自噬相关蛋白的变化，探讨TLR4在AD细胞中的作用及其与线粒体损伤的潜在联系。

材料与方法

1 主要试剂

大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞株PC12购自中国中科院上海细胞库；TLR4 shRNA慢病毒及空病毒（TLR4‐阴性对照）购自中国上海权阳生物科技有限公司；Aβ25‐35购自美国Sigma公司；RPMI‐1640培养基、胎牛血清、胰酶购自美国Gibco公司；……