邢晓华,袁 晖,赵必星

(福建医科大学孟超肝胆医院,福州 350025;*通讯作者,E-mail:heady@126.com)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌)发病率高,死亡率高,是世界范围内第四大恶性肿瘤[1]。目前手术切除是肝癌治疗的首选方式,但预后仍不理想[2,3],因此,寻找新的抗肿瘤药物是目前提高肝癌治疗疗效的首要任务。

神经前体细胞表达发育调控蛋白8(neural precursor cell-expressed developmentally downregulated-8,NEDD8)是最早发现和研究的类泛素蛋白之一[4],由81个氨基酸组成,与泛素具有59%的一致性和80%的同源性[5,6]。NEDD8与底物蛋白共价结合的过程为NEDD8共价修饰(neddylation),与泛素化修饰过程类似,也被称为类泛素化修饰。neddylation也需要经过活化酶1(enzyme 1,E1)、结合酶2(enzyme 2,E2)和连接酶3(enzyme 3,E3)催化将单个NEDD8分子共价连接到底物分子上,也是单个分子在底物上依次累加的过程[7]。

MLN4924是一种单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)类似物,通过与NEDD8结合抑制结合酶E2与NEDD8的结合,从而抑制了neddylation的发生过程[8-10]。目前,已有研究证实MLN4924在实体恶性肿瘤和血液恶性肿瘤中具有明显的抑癌作用,其作用机制主要是诱导DNA重新复制/损伤、诱导细胞凋亡/死亡/衰老和自噬、抑制血管生成等[11-13]。由于其在临床前研究中具有良好的抗肿瘤功效和可耐受的毒性,MLN4924目前正在几个Ⅰ/Ⅱ期临床试验中进行研究用于肿瘤治疗。但目前对于MLN4924在肝癌中发挥抗肿瘤效果的作用机制尚不明确,有待于进一步研究。

本研究旨在通过检测MLN4924对肝癌细胞增殖、迁移侵袭等恶性表型及相关信号通路的影响,探讨MLN4924抗肿瘤的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

Hep3B细胞购置于美国ATCC。NEDD8抑制剂MLN4924购于美国Selleck公司,CCK-8试剂盒购于Dojundo公司,Transwell小室购于美国Hyclone公司,β-actin,NEDD8,E-cadherin和N-cadherin等抗体购于美国Abcam公司。……