赵慧敏，张丹丹，陈晴，秦凌钰，何韶衡

过敏性疾病是一个全球公共卫生问题，屋尘螨(dust mite)是引起全世界过敏性疾病的主要原因之一。最近研究表明，治愈过敏性疾病的特异性免疫疗法由于不良反应风险限制了其广泛应用，使用纯化或重组过敏原可以提高治疗疗效以及安全性。并且，过敏原组分的单一性是新一代脱敏治疗候选药物的基本要求[1-4]。因此，从复杂的实际屋尘螨样本中分离出单一组分的过敏原蛋白Der p1是进行临床过敏性疾病诊断和治疗的关键。本研究使用PBS-T溶液对屋尘螨干粉中的过敏原蛋白进行粗提取，利用阳离子交换层析对粗提取液中的Der p1进行分离纯化，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对纯化的蛋白质进行鉴定，为临床过敏性疾病的诊断和治疗奠定基础。

1 材料与方法

1.1材料

屋尘螨干粉样本由锦州市锦州医科大学提供。

1.2 主要仪器与试剂

单盘电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司，中国)；Azure C300化学发光成像系统(Azure，美国)；高速冷冻离心机ST16R(Thermo Scientific，德国)；GE AKTA Pure蛋白质层析纯化系统(General Electric Company，美国)；桌上中试型冻干机Lyobeta mini(Telstar，西班牙)；高效液相色谱Waters Alliance HPLC(Waters，Belgium)；Mini-PROTEAN Tetra小型垂直电泳槽(Bio-Rad，美国)；Cascada III I全新智能纯水/超纯水一体化系统(Pall，美国)；甘氨酸、四甲基乙二胺(TEMED)、过硫酸铵(APS)、丙烯酰胺、N, N-亚甲基二丙烯酰胺、考马斯亮蓝R-250、KH2PO4、NH4HCO3和十二烷基硫酸钠(SDS)(国药集团，上海，中国)；蛋白相对分子质量标准(Takara生物技术有限公司，大连，中国)；磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution，PBS)-0.05 % Tween-20(简称 PBS-T)购自于Takara 生物技术有限公司(大连，中国)。

1.3 屋尘螨粗提……

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