张晓霞,张 琪,张皖静,赵悦琪,吴文静,杨 丹,许 燕,赵 凯3

(1 上海师范大学生命科学学院,上海200234;2 上海博满生物科技有限公司,上海201106;3上海市农业科学院生物技术研究所,上海201106)

猪圆环病毒(Porcine circovirus type,PCV)为圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus genus)的成员[1-2]。该病毒有两个血清型,即猪圆环病毒1 型(PCV1)和猪圆环病毒2 型(PCV2)[3]。通常认为,PCV1 不具致病性,但PCV2 具有致病性,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS)的主要病原[4]。PCV2 主要破坏猪的免疫系统,造成机体免疫抑制,抵抗力降低,产生其他病原微生物的继发感染[5-6]。PCV2 也与猪的其他多种临床疾病密切相关[7-8]。自1997年在加拿大首次报道PMWS 以来,PCV2 流行范围不断扩大,给养猪业造成了巨大的经济损失[9-11]。PCV2 感染猪的初期诊断与病猪的淘汰是PMWS 防治的关键,开发猪的PCV2 的定性、定量快速检测方法很有必要。

目前,PCV2 的检测技术主要有免疫学检测技术和分子生物学检测技术。免疫学检测技术有酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)、单层过氧化物酶试验(IPMA)等。其中,ELISA、IFA 和IPMA 主要用于PCV2 血清的检测[12-13]。PCV2 的分子生物学检测技术中最常见的是PCR 技术,但常规PCR 一般只能定性,不能定量。基因芯片通过荧光染料信号强度来推算每个探针对应的样品量,但是定量效果不好[14]。实时荧光定量PCR 技术(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQPCR)是以定性PCR 技术为基础发展起来的,是目前敏感性最高的核酸检测和定量技术。FQ-PCR 技术是根据荧光共振能量转移原理,在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程,最后通过Ct 值(Cycle threshod,循环阈值)和标准曲线对未知模板的起始浓度进行定量[15-16]。……