王文杰,葛 雷,张树山,吴彩风,戴建军,张德福

(上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室,上海201106)

自玻璃化冷冻保存技术在小鼠8 细胞期胚胎成功应用以来[1],因其方便、快捷和高效,得到了飞速发展,使哺乳动物种质资源保存成为现实。该技术在牛羊等家畜的胚胎冷冻中应用成熟,并在实际生产中得到了商业化应用[2]。由于猪的胚胎对低温非常敏感,容易受到低温损伤,导致其冷冻保存研究进展仍比较缓慢。我国直到2005年才成功获得猪胚胎超低温冷冻保存后代[3],但相关技术离实际生产应用仍有一定差距,需进一步对冷冻保护剂和冷冻方法进行优化。冻后氧化应激和细胞凋亡被认为是影响胚胎进一步发育的主要因素[4-5]。线粒体是细胞内极其重要的细胞器,是ATP 的主要供给来源。研究表明,冷冻可破坏卵母细胞或胚胎内的线粒体结构,造成线粒体功能障碍,直接影响其体外发育能力[6-8]。MitoQ是一种新型线粒体靶向抗氧化剂,可降低线粒体受到的氧化损伤。在人类精子冷冻保存中,刘丽等[9]发现MitoQ 能够明显降低精子氧化损伤,并显著提高其抗冻能力。本试验在猪卵母细胞体外成熟、胚胎培养及玻璃化冷冻与解冻过程中全程添加200 nmol∕L MitoQ,通过检测其线粒体膜电位、氧化应激水平、凋亡状态、发育能力和相关基因表达水平,探究MitoQ 对猪孤雌激活囊胚冷冻保存的影响。

1 材料与方法

1.1 化学试剂

本研究所用常规生化试剂除特殊说明外均购自美国Sigma 公司,培养液购自美国Gibco 公司,培养所用耗材购于丹麦Nunc 公司。……