李晨，卞凯鹏，熊英，张丽娟，匡梦岚，王岚，王恒，许键炜

间充质干细胞是一种源自发育早期中胚层，主要分布于骨髓、脂肪、脐血等组织，是具有自我更新、多向分化、免疫调节能力的干细胞[1-2]，体外培养扩增的间充质干细胞作为组织工程的种子细胞，可修复各组织和器官，也可用于器官或者组织移植。可以在脂肪、骨髓等组织中分离[3-4]。近来有研究表明，人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSC)不仅有间充质干细胞的特点，还有其独特的优势，如取材简单、细胞增殖迅速、没有伦理问题、连续传代后能维持细胞干性、低免疫原性、在体内不引起畸胎瘤等[5]。其可以稳定分化为神经细胞、肝细胞和软骨细胞等[6-7]。据研究表明，SDF-1与细胞信号传导、胚胎发育、细胞迁移、调节免疫、造血及血管生成相关[8]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 脐带

新生儿脐带来源于贵州医科大学附属医院妇产科。通过医院人体伦理委员会批准，并经产妇知情同意。

1.1.2 仪器

倒置荧光显微镜、Leica Logo型荧光显微镜及成像系统(德国Leica公司)；流式细胞仪(美国Beckman公司)；含有体积分数为5%CO2培养箱(美国Thermo公司)。

1.1.3 试剂L-DMEM培养基

Gibco公司；RPMI培养基：Gibco公司；FBS：BI公司100U/mL青-链霉素：Gibco公司；0.25%胰蛋白酶(Ttypsin-EDTA)：Gibco公司；2%二甲基亚砜 (DMSO) 和200 μmol/L 丁羟基茴香醚(BHA) Solarbio公司； FITC标记的抗人CD105、CD29、CD45和CD34抗体(BD公司)：SDF-1 Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 hUC-MSC的原代培养及传代

取健康安全的脐带(足月儿，不带细菌、病毒等)，无菌生理盐水清洗脐带表面，去除血凝块，清洗三遍后在75%酒精中浸泡30 s，用无菌生理盐水洗去残余酒精。将清洗后的脐带剪成3 cm长的小段，浸泡于无菌生理盐水中，每条脐带上有一条粗静脉和两条细动脉，将其剥离丢弃，再剥离血管周围的华通氏胶，并留取用来原代培养。……