彭志锋，黄 慧，张晓战，蒋增海，史洪涛，乔宏兴，边传周

(河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起的一种急性呼吸道传染病[1]。我国多个地区均发生和流行过PCP，每年造成养猪业重大损失[2-4]。近年来，APP分离率及传染性胸膜肺炎的发病率呈上升趋势[2,5]。同时，由于我国养猪业长期大量使用抗菌药，导致细菌多重耐药现象普遍，严重危害到人类健康。为此，我国农业农村部194号公告规定，自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。因此，限制抗生素使用情况下如何养好猪成为行业热点。APP细菌血清型众多，且不同地区菌株的耐药性差异较大，因而持续性监测致病菌的流行及药物敏感性，对于减少抗菌药物的使用、为PCP防控的精准用药提供科学依据是非常必要的。为此，分离鉴定APP，并在药敏试验基础上对四环素耐药基因进行PCR扩增和测序，以丰富APP的耐药性现状，并为临床用药提供科学依据，以利于更好地控制PCP。

1 材料和方法

1.1 菌株来源

从河南省信阳、商丘、安阳、洛阳、许昌五地区临床表现猝死、口鼻流血色泡沫的病死猪的肺脏中分离菌株；药敏试验质控菌株APP ATCC27090和大肠杆菌ATCC25922购自中国普通微生物菌种保存中心。

1.2 试剂

TSA、TSB购自北京奥博星生物技术有限责任公司；2×TaqMasterMix、DL2000 DNA Marker购自宝生物工程(大连)有限公司；质粒提取试剂盒和胶回收纯化试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司；……