陈润泽

（浙江农林大学 林业与生物技术学院，浙江 临安 311300）

1 材料与仪器

铁皮石斛花于2019年6月采摘于浙江省临安市天目山镇横塘村麻泥角弄智能温棚（N 119°26′11″，E 30°20′30″，海拔280 m），经浙江农林大学斯金平教授鉴定为兰科石斛属植物铁皮石斛盛开的鲜花。鲜花经90℃下杀青，60℃下烘干后备用。芦丁标准品，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇，均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司；实验用水均为去离子水（实验室自制）。

酶标仪，美国MD公司；电子分析天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；恒温电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；高速离心机，德国Heraeus公司。

2 试验方法

2.1 铁皮石斛花总黄酮的提取流程

取少量烘干备用的铁皮石斛花磨粉，按物料比溶于不同浓度的乙醇溶剂中，在超声波仪中提取一段时间后低温离心，取上清液过膜，即制得铁皮石斛花总黄酮提取液。

2.2 芦丁标准曲线的制作

配置浓度为0.8 mg·mL-1的芦丁对照品溶液，精密吸取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、2.0 mL 芦丁对照品溶液于25 mL容量瓶中，加80%的乙醇溶液补足至2 mL。依次加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min；加入10%硝酸铝溶液1 mL摇匀放置6 min，再加入4%氢氧化钠溶液10 mL，用80%乙醇定容至25 mL，摇匀放置15 min后在酶标仪510 nm波长处测定吸光度并绘制标准曲线（纵坐标为吸光度A，横坐标为芦丁质量浓度C）。

2.3 总黄酮含量的测定

取0.500 0（±0.003）g铁皮石斛花置于50 mL离心管中，按照物料比加入一定体积的乙醇溶剂，超声一段时间后冷却至常温经4 000 rpm，离心10 min，取上清液过膜得样品溶液。……