张沛灵 慈政 贾立涛 刘豫 曹谊林 周广东

软骨缺损是临床常见的疾病之一。由于缺乏血管与神经，软骨组织一旦受损便很难进行自我修复［1-2］。目前的治疗手段主要包括软骨成形术、自体软骨细胞移植、自体软骨组织移植等，但均有其局限性［3］。组织工程技术为临床软骨修复提供了新的途径和更广阔的应用前景［4-5］。组织工程研究主要包括三个方面：种子细胞、支架材料和生长因子。其中，数量充足的种子细胞是组织再生的物质基础，支架材料可以提供适宜的生理微环境，对体外构建软骨具有关键作用。

近年来，来源于各种组织和器官的脱细胞基质支架越来越受到重视，被用于各种类型受损组织和器官的修复与再生［6-8］。软骨脱细胞基质（Acellular cartilage matrix，ACM）具有天然的促软骨形成微环境，是最理想的软骨组织工程支架材料。骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）具有软骨定向分化潜能，是一种理想的种子细胞来源。

本研究将脱细胞处理后的软骨组织粉末以不同比例与明胶（Gelatin，GT）溶液混合并交联，制成多孔仿生三维支架。接种山羊BMSCs 后体外短期诱导，观察细胞在支架上的黏附、分布与基质分泌情况，并评估BMSCs 的成软骨分化能力，为ACM 支架复合BMSCs 体外再生软骨的研究和临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要实验试剂、仪器与动物

DNase、RNase、抑肽酶、Tris-HCl、Triton X-100、明胶、EDC、NHS（Sigma，美国）；低糖DMEM 培养基、0.25%胰蛋白酶、青霉素-链霉素-两性霉素B（Gibco，美国）；胎牛血清、PBS（Hyclone，美国）；DNA 定量试剂盒（Invitrogen，美国）；DAPI（武汉赛维尔生物科技有限公司）。

荧光显微镜（Leica，德国）；扫描电镜（Philips XL-30，荷兰）；……